亿迅生物-组织细胞总蛋白抽提试剂盒简便高效。


描述：从组织细胞中提取总蛋白是 Western Blot 的关键步骤。实体软组织如脑脊髓富含磷脂，神经血管含大量结缔组织，而脂肪则含有大量油脂，常规的方法难以有效从这些组织中提取蛋白。本试剂盒为组织或培养细胞总蛋白提取提供完整的解决方案。用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，或直接用裂解-结合缓冲液重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分，离心、干燥后即可得到总蛋白。蛋白沉淀溶解后用常规方法进行蛋白定量。提取过程可在 30-60 分钟内完成，可在 1.5mL 离心管微量提取也可大规模制备，为简便高效。

 

 

 

规格： 50次  100次

 

储存：室温或4ºC   24个月有效

 

 

 

培养细胞蛋白提取 (参见固体组织蛋白提取程序中的斜体字注解)

 

1.         消化洗涤并 800 g 离心收集细胞。每 5-10 × 106 细胞加入 0.5 mL 裂解液，振荡重悬，4ºC 净置 2 分钟。

 

2.         按比例每 0.5 mL 裂解液加入 1 mL 抽提试剂，振荡混匀。4ºC 静置 10min。

 

3.         10,000g 4ºC 离心 10 分钟，溶液分为两相，两相中间为蛋白膜。小心吸除上层相和大部分下层相，保留两相中间的蛋白絮状物。如果不能分相，可再加入 50μl 蒸馏水混匀离心。

 

4.         加入 1 mL 纯乙醇洗涤沉淀。10,000g 4ºC 离心 3 分钟，蛋白沉淀在管底。

 

5.         去除管中所有液体，敞开管口，室温空气干燥蛋白沉淀。未溶解的蛋白沉淀不含盐、去垢剂、和还原剂成分，可4ºC或－20ºC 一年以上。

 

 

 

说明

 

1.         按照上述提取和溶解过程，不加蛋白酶抑制剂，而蛋白不会有明显降解，用户不必(但可以)加入蛋白酶抑制剂。

 

2.         蛋白定量。注意使 SDS 浓度稀释到不影响蛋白定量的水平，或选择不受 SDS 影响的 BCA 定量方法。BCA 法<5% SDS浓度，Bradford 法<0.125% SDS 浓度。

 

3.         按比例可进行大规模的(多至1 g) 组织蛋白提取。

 

提取试剂对眼睛和呼吸系统有一定刺激性，皮肤不慎接触可用水清洗。