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甘油含量检测试剂盒实验总结
点击次数：415发布时间：2022/3/18
甘油含量检测试剂盒实验总结
甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，但检测更方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法和经典GPO-Trinder酶学反应相结合的方法，通过比色法测定液体样本中的甘油含量。经过优化后，操作步骤更加简单，检测线性范围在10-1200µmol/L，可靠性和重复性俱佳，适合生物医学、食品实验室检测。
操作步骤：
一 样本处理：
酒类、饮品、清澈液体样本：可直接进行测定，如超过线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后再测定。
培养液：取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基，如有细胞碎片应4ºC,，12,000g离心5min,取上清进行测定。
血液：新鲜抗凝血，4ºC，2,000g离心5min得到血浆；非抗凝血，先4ºC静置2h得到血清后，2000g离心10min,除去血细胞。将得到的血浆/血清70ºC 加热10分钟灭活內源脂肪酶，12,000g离心10min ,取上清测定或-20ºC保存。
二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合，立即使用或4ºC保存<1天，变色弃去。
三 标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意设置0浓度对照反应管。
检测总结：
(a)液体样品: 清澈的或稍有些颜色的，pH大约为中性的液体样品可以直接检测。
(b)酸性样品: 如果样品为> 0.1 mL的未被稀释的酸性样品（如葡萄酒或果汁），必须用2 M NaOH调节pH到大约7.4，然后在室温中孵育30分钟。
(c)含二氧化碳样品: 样品中含有大量的二氧化碳，如：啤酒，必须用2 M NaOH调节pH到大约7.4，并缓慢的用玻璃棒搅拌。
(d)有颜色的样品: 测试中附加样品空白，如：样品中不含有GK，在这种情况下，样品必须附加样品空白。
(e)重颜色的样品: 如果未经稀释的样品颜色非常深，需要向每10mL的样品中加入0.2g聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP），充分混合5分钟，然后用Whatman No. 1滤纸过滤。
(f)固体样品: 均质或粉碎固体样品，然后加入到蒸馏水中，并过滤。
(g)样品含有脂肪: 需要用超过脂肪沸点的水进行提取，如：将100mL容量瓶加热到60°C，然后恢复至室温，并补液至刻度线，放置冷藏箱中15-30分钟，过滤，弃去初的几mL滤液，选择澄清的或稍有些乳白色的悬浮液进行测试。也可以选择使用Carrez 溶液进行澄清。
(h)样品中含有蛋白: 使用Carrez 溶液去除样品中的蛋白。
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