甲基化检测BSP/MSP法

服务简介：

DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容，它可以抑制基因的表达。甲基化通常发生在胞嘧啶的C5位，形成5-甲基胞嘧啶（5mC），甲基化的胞嘧啶多位于CpG岛上。DNA甲基化在人的正常发育、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病（如发育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等）过程中发挥重要作用，已经成为表观遗传学和表观基因组学的重要研究内容。该方法为甲基化检测的金标准，可定量检测基因甲基化水平。基因组DNA经亚硫酸氢盐处理后，设计BSP引物扩增目的片段，*后对PCR产物进行克隆并选取10个转化子序 列，即可确定所研究的CpG区域的甲基化频率。目前，基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（Methylationspecific PCR,MSP）和硫化测序PCR（Bisulfite sequencing PCR, BSP）。

服务原理：
 BSP：甲基化的胞嘧啶在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变，用一对特异性引物扩增后测序，再与DNA原始序列比对确定甲基化位点。测序法克服了只能针对单个位点检测，并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点，可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测。

MSP: 原理是基于DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。基于这种碱基的改变，然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增，*后通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。这种方法适于研究中大量样本的DN***段，具有方便快捷，灵敏度高的优点，是目前较为常用的甲基化检测方法。

服务流程：
1、根据目的基因启动子序列设计相应的引物；        

基因组DNA的提取和定量；

亚硫酸氢钠修饰基因组DNA                 

修饰后DNA纯化回收；

a.结合实时定量PCR的qMSP
   b.BSP，对PCR产物进行测序并与未经处理的序列比较；
6、数据处理                      

向客户提供数据分析结果与实验报告。

收费标准/服务周期/提供结果：
欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

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