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原位杂交/CISH/组织原位杂交/细胞原位杂交 原位杂交
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详细内容
原位杂交
服务简介:
原位杂交组织(或细胞)化学 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 简称原位杂交(In Situ Hybridization),属于固相分子杂交的范畴,它是用标记的DNA或RNA为探针,在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同,原位杂交可分为DNA-DNA杂交,DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交三类。根据探针的标记物是否直接被检测,原位杂交又可分为直接法和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交,杂交后分别通过放射自显影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间接法一般用半抗原标记探针,*后通过免疫组织化学法对半抗原定位,间接地显示探针与靶核酸形成的杂交体。
服务流程:
1. 根据客户送的样本(固定好或者包埋好),以及样本类型,安排实验
2.包埋或者切片后,根据客户所测指标,设计特异性探针,标记示踪物。然后进行一系列反应。
3.(可选)根据上述所做好的切片进行拍片,分为荧光显微镜(激光共聚焦显微镜)或普通光学显微镜
4.(可选)针对做好的玻片进行分析,分析时选取较好的区域,分析三个视野
5.提供实验报告:包括详细的实验方法及原位杂交实验结果的相关图表
操作步骤:
取材:
● 0.1M PBS (pH 7.2) 浸 5-10min。
● 0.1M甘氨酸/0.1M PBS 浸5min。
● 0.3%TritonX-100/0.1M PBS 浸10-15min。
● 0.1M PBS 洗 5min×3次,加蛋白酶K(1μg/ml),37℃孵育30 min。
● 4%多聚甲醛浸5min。
● 0.1M PBS 洗 5min×2次,浸入新鲜配制的含0.25%乙酸酐/0.1M三乙醇胺中10min。
预杂交:滴加适量预杂交液,42℃ 30 min。
杂交:倾去预杂交液,在每张切片上滴加10-20μl杂交液(将探针变性后稀释在预杂交液中,0.5 ng/μl ),覆以盖玻片或蜡膜,42℃ 过夜。(阴性对照)
洗片:(1) 4×SSC、2×SSC、1×SSC、0.5×SSC 37℃各洗20min;0.2×SSC 37℃洗10min;0.2×SSC与0.1M PBS各半洗10min;0.05M PBS 洗 5min×2次。
● 3% BSA/0.05M PBS 包被,37℃ 30min.
● 滴加抗...-抗血清碱性磷酸酶复合物(以抗体稀释液1:5000稀释)4℃孵育过夜。
● 0.05M PBS洗15min×4次; TSM1 10min×2次; 新鲜配制TSM2 10min×2次。
显色:在玻片上滴加适量显色液,4℃避光过夜。
● 将玻片置于TE中10-30min以终止反应。
● 酒精梯度脱水、二甲苯脱脂。
● 中性树胶封片,显微镜下观察结果
交货内容:
完整的实验报告,包括实验过程、所用仪器试剂、蜡块玻片和相关分析数据
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
【本公司合作项目】
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