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人类SOS1交换域(564-1049)蛋白(SOS1 ExD)已在细菌表达系统中产生。重组蛋白的氨基末端含有个6组氨酸标签(His标签)。SOS1 ExD蛋白的分子量约为61 kDa。蛋白质以冻干白色粉末的形式提供。
SOS1 Ras GEF蛋白纯度测定(左图):
左图:在4-20%SDS-PAGE系统中通过电泳分离出20μg重组SOS1 ExD蛋白样品(分子量约61 kDa)。蛋白用考马斯蓝染色。使用精密红色蛋白质分析试剂(Cat.#ADV02)测定蛋白质定量。Mark12分子量标记来自Invitrogen。
右图:将Ras蛋白添加到96孔半面积板的孔中,该板含有稀释的交换缓冲液和混合孔。为了启动交换反应,将SOS1 ExD蛋白(红色三角形)或稀释缓冲液(灰色三角形)添加到孔中,混合,并使用Tecan SpectraFluor Plus分光光度计进行荧光测量。将重复分析的平均荧光数据标准化为零时间点的荧光。使用GraphPad Prism软件将结果数据绘制为相对荧光单位(ΔRFU)随时间的变化。
SOS1 Ras GEF 蛋白试剂:
1.重组Ras蛋白
2.重组SOS1 ExD蛋白(Cat.#GE02)
3.2倍交换缓冲液(40 mM Tris pH 7.5,100 mM NaCl,20 mM MgCl2,0.1 mg/ml BSA,1.5μM mant GTP)
4.稀释缓冲液(20 mM Tris pH 7.5,50 mM NaCl,10 mM MgCl2,0.1 mg/ml BSA)