BellBrook 艾美捷Transcreener 检测试剂盒用于药物发现的稳健、可重复、易于使用的酶活性测定。通过直接检测酶促反应的常见产物，例如激酶的 ADP，Transcreener 提供了种可用于整个目标家族的通用方法。其他通用测定方法引入了多个耦合步骤，产生了更多的干扰，从而提供了假阳性和假阴性。直接检测和远红荧光读数可限制干扰，产生准确的结果，加速药物发现。

自 2006 年推出以来，Transcreener 激酶检测试剂盒已在数百万个孔中用于 HTS 和先导发现。

BellBrook 艾美捷Transcreener 检测试剂盒案例展示：

1、使用 Transcreener 激酶检测试剂盒发现 IRAK4 抑制剂

Genentech 使用 Transcreener Kinase Assay Kit 发现 IRAK4 抑制剂——IRAK也称为 Interluekin-1 Receptor Associated Kinase。该组中有四种不同的蛋白质，包括 IRAK1、IRAK2、IRAK3 和 IRAK4。这些中的每个都介导与 MyD88 及其相关衔接蛋白的相互作用。IRAK1 和 IRAK4 是具有激酶活性的活性酶，而 IRAK3 通常被认为是无活性的。IRAK2 曾被认为是无活性的，但研究表明其激酶活性对 TLR 信号传导至关重要。

由于上游 toll 样受体激活 IRAK4，它使 IRAK1 磷酸化。IRAK1 然后通过其激酶活性自磷酸化并激活下游底物。该联反应导致 MAPK 和 NF-κB 的激活以及促炎细胞因子的产生。2进步的研究支持将 IRAK4 作为先天免疫靶点。在这些研究中，IRAK1 基因敲除小鼠在遭受“实验性自身免疫性脑脊髓炎”时几乎没有或没有炎症。3还发现具有 IRAK4 突变的患者存在促炎细胞因子和抗炎细胞因子产生的问题。

调节 IRAK4 的化合物为小分子药物治疗炎症和免疫疾病提供了潜在途径。与 IRAK4 相关的些疾病包括癌症、狼疮、炎症性肠病、关节炎和糖尿病。

在药物发现中使用激酶检测试剂盒

在近发布的zhuanli中，Genentech讨论了它如何使用Transcreener Kinase Assay Kit 来测量酶活性并确定各种化合物的 Ki 值。总之，使用合成的 IRAK1 肽作为底物测试了 IRAK4 测定条件。将样品孵育 90 分钟，达到目标 10% 的 ATP 转化为 ADP。该测定的敏感性使研究人员能够使用低 nM 浓度的 IRAK4 (1.25 nM)。还使用先讨论的相同合成肽底物测量了 IRAK1 活性。还使用 10% 的转化率，起始 ATP 浓度为 62.5 uM。然后在 Tecan M1000 读板机上读取化验结果，随后分析数据。举例说明了纳摩尔抑制剂的例子。

使用激酶测定试剂盒测量酶活性对于在高通量筛选过程中寻找新的抑制剂至关重要。检测必须足够稳健，可以在大屏幕上处理数小时，但又必须足够准确，以提供可靠、可重复的数据和良好的灵敏度。正如基因泰克所说明的那样，后续的 SAR 对于构建正确的化合物集以在临床上进行治疗至关重要。像 Transcreener 这样的生化激酶检测试剂盒是发现新抑制剂并将其固化为先导化合物的关键组件。IRAK4 是个引人注目的先天免疫靶点，看看临床试验如何发现类风湿性关节炎等疾病的潜在治疗方法将会很有趣。

2、研究人员使用 Transcreener ATPase Assay 验证 Hsp70 活性

正在研究新表达的人类 Hsp70 活性——热休克蛋白 70 (Hsp70) 以在压力期间上调以维持体内平衡而闻名。与其他热休克蛋白样，Hsp70 是种伴侣蛋白，可帮助其他蛋白质正确折叠成为完全活跃的分子。它与受损、错误折叠或部分折叠的蛋白质结合，使它们无助，直到时机成熟；在其调节蛋白质折叠的作用的情况下，压力已经过去或形成完全合成的蛋白质。但是，这还不是全部。除了保护细胞和保持其他蛋白质的完整性外，Hsp70 通过阻断 procaspase-9 向凋亡复合体的募集来抑制细胞凋亡。通常，这些细胞存活机制是保持我们健康所必需的。然而，由于同样重要的细胞功能，热休克蛋白会导致神经退行性疾病和癌症。

Hsp70 ATP酶活性

Hsp70 具有三个结构域。在其自然状态下，它与 ATP 结合；然而，当需要通过不允许错误折叠的蛋白质聚集来保护细胞时，它会释放 ATP 并与 ADP 结合；ATP酶活性增加。当与 cochaperone、热休克蛋白 40 (Hsp40) 相互作用时，活性增加得更多。1,2,3 Hsp40 蛋白具有多肽结合结构域 (PPD)，能够将多种其他分子结合并递送至 Hsp70。1在 ATP 释放期间，Hsp70 上的构象变化允许错误折叠的蛋白质结合。同样，旦 ADP 被释放并且 ATP 再次结合，部分折叠的蛋白质就能够自由移动。

生产全长和活性人 Hsp70

由于我们目对 Hsp70 的了解来自大肠杆菌同源物，其共享约 50% 的氨基酸同性，Marcion 等人。很高兴能创造出重组全长人类热休克蛋白 70 (hHsp70)。2BellBrook 的 Transcreener® Assay技术使研究人员能够在纯化后确认其功能。验证功能非常重要。该蛋白质必须具有活性才能进步研究并可能找到种抑制剂来对抗过量 Hsp70 的负面影响。该测定表明，当与人 Hsp40 结合时，Hsp70 活性增加，就像它在体内样。

对于那些有兴趣研究 hHsp70 和寻找治疗分子来帮助那些患有癌症和/或神经退行性疾病的人来说，这发现是令人振奋的消息。

以上就是两个有关于BellBrook 艾美捷Transcreener 检测试剂盒的成功案例。

BellBrook致力于蛋白质靶标的高通量筛选工具，助力制药和生物技术公司、CRO 和学术实验室加速药物发现。Transcreener 高通量筛选 (HTS) 平台，可以提供的直接检测有：ADP2，AMP2/GMP2，GDP，UDP2等检测。艾美捷科技是BellBrook的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/BellBrook-Labs.shtml