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葡萄糖和 ATP测定丨Worthington葡萄糖-6-磷酸脱氢酶方案
点击次数:0发布时间:2022/7/22 16:12:58
更新日期:2022/7/22 16:12:58
所 在 地:中国大陆
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L. mesenteroides 的 G6PD 因其独特的双辅酶特异性而得到了非常详细的研究。大多数脱氢酶更喜欢 NAD +或 NADP +,但 L. mesenteroides G6PD 都可以使用。
艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脱氢酶特异性:
NAD 或 NADP 都可以作为辅酶,NAD 的内在反应速度大约是 NADP 的 1.8 倍(Olive 和 Levy 1967)。D-葡萄糖-6-磷酸被认为是天然底物,尽管 D-葡萄糖反应缓慢 (Metzger et al . 1972)。
Asp177 和 His240 形成 G6PD 的催化二元组。His240 作为从 6-磷酸葡萄糖中提取 C-1 质子的碱基;Asp177 稳定产生的正电荷 (Cosgrove et al . 1998)。
作品:
L.mesenteroides G6PD 是相同亚基的二聚体,每个二聚体有两个活性位点,假定位于辅酶结合位点和每个亚基中的大 β+α 结构域之间的口袋中(Rowland等, 1994)。这个口袋包含几个完全保守的氨基酸,包括个八残基肽(Cosgrove et al . 1998)。
分子特征:
L. mesenteroides G6PD 基因编码 485 个氨基酸的多肽。G6PD 的独特之处在于它不含半胱氨酸残基。已经确定了在生理条件下仅使用NADP +的人和大肠杆菌的序列。Z. mobili的序列与L. mesenteroides样可以使用 NADP +或 NAD +,也已确定。这些物种中的任何两个之间大约有 30-36% 的序列同性。个保守的序列从 Arg175 开始,并含有个赖氨酸残基,被认为在葡萄糖-6-磷酸结合中起作用 (Lee et al . 1991)。
艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的特性:
分子量:440,000 (Lee and Harpst 1973; 另见 Main et al . 1974)
组成:Lee 和 Harpst (1973) 指出 ButChE 是种四聚体结构,具有相同大小的 110,000 道尔顿的亚基。它是种糖蛋白。主要等人。(1974) 已经确定了氨基酸和碳水化合物的组成,基于 101,000 的颗粒重量。另见 Chiu等人。(1972 年)和帕夫利奇(1972 年)。
佳 pH 值:6.0-8.0 (Augustinsson 1960)
消光系数:E 280 =13.6 (Main et al . 1974)
活化剂:Ca 2+和 Mg 2+ (Augustinsson 1960)
艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的应用:
1.测量 NADPH 或 NADH 的系统(Bhattacharya 和 Ali 1988)
2.葡萄糖和 ATP(与 HK 偶联时)、果糖、6-磷酸葡萄糖、NAD(P) +和 CK的测定
相关文献:
1.Anderson, W. 和 Nordlie, R.: 酵母葡萄糖 6-脱氢酶的葡萄糖脱氢酶活性。I. 碳酸氢盐、磷酸盐和硫酸盐的选择性刺激 , Biochemistry 7 , 1479, 1968
2.Balaguer, P.、Terouanne, B.、Eliaou, J.、Humbert, M.、Boussioux, A. 和 Nicolas, J.: 使用葡萄糖 6-磷酸脱氢酶作为核酸杂交反应的新标记 , 肛门生化 180 , 50, 1989
3.Ben-Bassat, A. 和 Goldberg, I.: 来自甲醇生长的假单胞菌 c.的葡萄糖 6-磷酸脱氢酶 (NADP + /NAD + ) 和 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 (NADP +/ NAD + ) 的纯化和性质。 , Biochim Biophys Acta 611 , 1, 1980
Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。