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Worthington果胶酶的特性及测定方案
点击次数:0发布时间:2022/7/26 17:02:35
更新日期:2022/7/26 17:02:35
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
主要的:
果胶裂解酶 (4.2.2.10)
多聚半乳糖醛酸酶 (3.2.1.15)
半乳聚糖 1,4-α-半乳糖醛酸酶 (3.2.1.67)
次要的:
纤维素酶(内切纤维素酶(3.2.1.4)、外切纤维素酶( 3.2.1.91) 、纤维二糖酶(3.2.1.21))
半纤维素酶 (3.1.1.73)
果胶酯酶 (3.1.1.11)
木聚糖酶 (3.2.1.8)
艾美捷Worthington 黑曲霉果胶酶的特性:
除了其高酶活性外,纯化的果胶酶还门用于植物原生质体培养研究。使用定量测量D-半乳糖醛酸从多聚半乳糖醛酸中释放的方法测定酶。该方法基于使用盐酸新铜碱显色试剂测定法测定还原糖。当与 Worthington 纯化的纤维素酶起使用时,已发现纯化的果胶酶可用于在几种植物系统(例如玉米、大豆、红甜菜、向日葵、番茄和柑橘)中产生良好产量的活原生质体。般来说,浓度范围为 0.1% 至 0.5% 的果胶酶(伴随着 0.5% 至 1.5% 的纤维素酶)在 24°C 至 37°C 下使用 1 至 16 小时会产生良好的效果。
储存: 储存于 2-8°C。防潮。如果不次使用整个瓶子,在到达时称重成次性等分试样,并盖紧、干燥、冷藏保存。材料非常吸湿,如果暴露在湿气中会变得发粘且难以称重。
稳定性/储存: 防潮。如果不次使用整个瓶子,在到达时称重成次性等分试样,并在 2-8°C 下盖紧并干燥储存。材料非常吸湿,如果暴露在湿气中会变得发粘且难以称重。
单位定义:个单位在 37°C、pH 5.0 下每分钟从聚半乳糖醛酸中释放 1µmole D-半乳糖醛酸。
技术说明:果胶酶具有J强的吸水性;储存干燥以防受潮。
艾美捷Worthington果胶酶的测定:
方法:在 37°C,pH 5.0 条件下,个单位每分钟从聚半乳糖醛酸中释放 1 umole D-半乳糖醛酸。
试剂:
0.1 M 柠檬酸/磷酸盐缓冲液(测定缓冲液),pH 5.0
颜色试剂 A:将 40g 无水 Na 2 CO 3溶解 在 600 ml 试剂 H 2 O 中。加入 16 g 甘氨酸并搅拌直至溶解。加入 0.450 gm CuSO 4 5H 2 O,搅拌至溶解。用试剂 H 2 O 加至 1 升。
颜色试剂 B:将 1.2 g neocuprine - HCl 溶解在 1 升 H 2 O 试剂中。在 4°C 下储存在棕色瓶中。
D-半乳糖醛酸标准品,1mg/ml
0.5% 聚半乳糖醛酸底物:
在热板上加热 500 ml 检测缓冲液。在加热和搅拌的同时,缓慢加入 2.5 gm 聚半乳糖醛酸。加热并搅拌直至溶解。它会有点粘稠和不透明。不要让溶液沸腾。如有必要,冷却并恢复音量。储存于 4°C。
酶:
每天化妆新鲜。将溶液放在冰上直至使用。在检测缓冲液中连续稀释至 0.01 mg/ml。
程序:
准备三个试管,每个试管含有 1 ml 缓冲液和 6 ml 底物(试剂空白)。准备三个试管,每个试管含有 6 ml 底物和 1 ml 0.1 mg/ml 的酶样品(测试)。准备三个试管,每个试管含有 6 ml 缓冲液和 1 ml 浓度为 0.1 mg/ml 的酶样品(样品空白)。
将试管在 37°C 水浴中孵育 60 分钟 ± 1 分钟。使用 10 μg 至 125 μg 的 D-半乳糖醛酸标准品将标准曲线管分装,式三份。
试管孵育 60 分钟后,立即将支架放入冰水中以停止反应。从每管 100 μl 中分装到另组管中(也在冰上)。向每个反应管和标准管中加入 2 ml Color Reagent A 和 2 ml Color Reagent B。倒置充分混合。将机架放入沸水浴中 13 分钟 ±1 分钟。冷却试管,然后加入 2ml H 2 O。倒置充分混合。使用次性比色皿读取 A 450与水空白的吸光度。不要使用流通池;橙色附着在玻璃上。计算每组式三份的平均吸光度。
计算:
绘制标准曲线:
计算变化率。曲线应该是线性的,直到 100 ug D-半乳糖醛酸,如果不是,用新鲜试剂重复曲线。
Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。