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Worthington过氧化物酶活性的6种测定方法

点击次数:0发布时间:2022/7/26 17:03:32

Worthington过氧化物酶活性的6种测定方法

更新日期:2022/7/26 17:03:32

所 在 地:中国大陆

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简单介绍:Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。

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详细内容

 过氧化物酶 (HRP) 是种血红蛋白,可催化过氧化氢氧化多种底物,例如抗坏血酸盐、细胞色素 和许多染料的无色形式。HRP 的分子量为 40 kDa,适 pH 值为 7.0。稳定性:HPOFF  2-8°下可稳定 9-12 个月。HPOD  2-8°下可稳定  年。

 

单位定义:个 Worthington 单位在 25°CpH 7.0 下使用氨基安替比林和苯酚每分钟分解 1µmole H 2 O 2 

 

技术说明:RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比率,A 403 /A 275,已被用作纯度的指示。然而,Shannon et al., JBC, 241 , 266 (1966) 报道了同工酶的这个比率在 2.50 到 4.19 之间变化。这点,连同缓冲液和 pH 值的影响,似乎使这个比率作为纯度标准的准确性受到质疑。

 

许多不同的方法用于过氧化物酶活性的测定。下面列出了由艾美捷Worthington确定的些近似转换。

• 个 Worthington 单位 = 4.6 个 Worthington 以使用的邻联苯胺单位

• 个 Worthington 单位 = 0.62 个 ABTS 单位(每分钟氧化的微摩尔染料,pH 6.025°C1.7 mM 染料)

• 个 Worthington 单位 = 2 个 ABST 单位( µmole 每分钟氧化的染料,pH 5.025°C8.7 mM 染料)

• 1 Worthington 单位 = 0.5 愈创木酚单位(每分钟氧化愈创木酚的 µmolepH 7.025°C

• 1 Worthington 单位 = 0.5 连苯三酚到 purpogallin单位(mg 产品每 20 pH 6.020°C

• 1 Worthington 单位 = 5 连苯三酚到 purpogallin 单位(在 pH 6.030°下每分钟微摩尔产品)

 

艾美捷Worthington过氧化物酶的测定:

方法:传统上,过氧化物酶活性以连苯三酚的氧化速率为单位表示,这是 Willstalter 和 Stoll 在 1917 年引入的种方法,近的研究表明这种方法有些不足。(Maehly 和 Chance 1954。)在过氧化物酶测定系统中已经使用了多种氢供体,包括可能致癌的化合物,例如邻联茴香胺。采用 4-氨基安替比林作为氢供体的改进测定法已被采用(Trinder 1966)。反应速率通过测量过氧化氢分解引起的 510 nm 处吸光度的增加来确定。在指定条件下,在 25°和 pH 7.0 条件下,个单位会导致每分钟分解 微摩尔过氧化氢。

 

试剂:

0.2 M 磷酸钾缓冲液 pH 7.0

0.0017 M 过氧化氢。用试剂水将 1 ml 30% 过氧化氢(Merck Superoxol 或等效物)稀释至 100 ml。用 0.2 M 磷酸钾缓冲液 pH 7.0 将 1 ml 该溶液进步稀释至 50 ml。每天准备新鲜。

0.0025 M 4-氨基安替比林和 0.17 M 苯酚:通过将 810 mg 苯酚溶解在 40 ml 试剂水中进行制备。加入 25 mg 4-氨基安替比林并用试剂水稀释至终体积为 50 ml

 

酶:

以 1 mg/ml 溶解在试剂水中。临用,进步稀释以获得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。

程序:

将分光光度计调整到 510 nm 和 25°C

将移液器移入每个比色皿,如下所示:

苯酚/氨基安替比林溶液 1.4 毫升

0.0017 M过氧化氢 1.5 毫升

 

在分光光度计中于 25°孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并确定空白率(如果有)。加入 0.1 ml 稀释酶并记录 A 510的增加4-5 分钟。从曲线的线性部分计算ΔA 510 /分钟。

 

计算:

注:虽然用苯酚安替比林法得到的反应速率比以的方法低 4.5-4.7 倍,但过氧化物酶制剂是相同的。

 

RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比,A 403 /A 275 (RZ) 已被用作纯度的指示。然而,香农等人。(1966) 报告说,同工酶的这个比率从 2.50 变化到 4.19。这点,连同缓冲液和 pH 值的影响,似乎使这个比率作为纯度标准的准确性受到质疑。

 

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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