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Worthington酸性磷酸酶的特征和测定(附文献)
点击次数:0发布时间:2022/7/26 17:03:54
更新日期:2022/7/26 17:03:54
所 在 地:中国大陆
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酸性磷酸酶在自然界中无处不在,也许集中的来源之是人类列腺,临床化学家利用这事实测量血清酶水平作为列腺癌的指标。它还与戈谢病有关,患者在其电泳血清中表现出独特的峰(Goldberg等人1966)。酸性磷酸酶已由 Hollander (1971) 进行了综述,但不包括小麦胚芽酶。
Teller 于 1954 年在 Singer 于 1948 年描述的小麦胚芽脂肪酶制剂中观察到酸性磷酸酶活性。随后的工作证实,小麦胚芽制剂的非特异性酯酶活性可以用脂肪酶(作为底物的示踪素)和磷酸酶来测量.
该酶已被至少三个不同的实验室纯化并描述了其特性。Joyce 和 Grisolia (1960) 将其纯化了大约 3000 倍,并测量了它对各种磷酸酯的活性。Brouillard 和 Ouellet (1965) 通过离子交换获得了四种不同形式的酶,并提供了分子中存在三价铁的证据。Verjee (1969) 获得了三个活性峰,并表明它们具有各自的特性。
艾美捷 Worthington小麦胚芽酸性磷酸酶的特性:
分子量:55,000 ± 5,000 (Verjee 1969)。
组成: Verjee (1969) 报道了三种分子量非常相似的同工酶:EI、EII 和 EIII。另见 Brouillard 和 Ouellet (1965)。
佳 pH 值:EI - 5.5、EII - 4.5 和 EIII - 4.0。(维吉 1969 年)。
特异性:该酶具有广泛的酯酶活性。参见乔伊斯和格里索利亚 (1960)。它显示出对焦磷酸的高活性。
抑制剂:氟化物、钼酸盐和正磷酸盐(Verjee 1969)。
艾美捷 Worthington小麦胚芽酸性磷酸酶的测定:
方法:基于 Brandenberger 和 Hanson (1953) 和 Hofstee (1954) 的工作。磷酸邻羧基苯酯的初始水解速率是根据水杨酸释放引起的 300 nm 处吸光度的增加来确定的。在指定条件下,个单元在 25°C、pH 5.0 下每分钟水解 1 微摩尔邻羧基苯基磷酸酯。(在上述条件下使用对硝基苯基磷酸酯底物获得了等效的比活性)。
试剂:
0.15 M 醋酸钠缓冲液,pH 5.0
3.65 mM 邻羧基苯基磷酸酯
酶:
以 1.0 mg/ml 的浓度溶解在试剂水中。
程序:
将分光光度计调整到 300 nm 和 25°C。
将移液器移入每个比色皿,如下所示:
0.15 M 醋酸盐缓冲液,pH 5.0 2.0毫升
3.65 mM 邻羧基苯基磷酸酯 0.5 毫升
在分光光度计中孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并确定空白率(如果有)。添加 0.5 ml 酶并在 A 300中记录增加 4-5 分钟。从曲线的初始线性部分计算 ΔA 300 /分钟。
计算:
Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
来源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml