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酪氨酸脱羧酶丨Worthington粪链球菌酪氨酸脱羧酶的特征
点击次数:0发布时间:2022/7/28 15:03:19
更新日期:2022/7/28 15:03:19
所 在 地:中国大陆
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5'-磷酸吡哆醛是种必需的辅酶。通过利用在维生素 B6 缺乏培养基上生长的细胞制备的脱辅酶 (TYDAPO),可以测定磷酸吡哆醛。参见 Umbreit等人。(1945) 和 Gunsalus 和史密斯 (1957)。放射性标记的酪氨酸的脱羧作用允许测定更少量的磷酸吡哆醛(Maruyama 和 Coursin 1968;Sundaresan 和 Coursin 1970)。丙酮干燥的细胞被用作相对简单的脱辅基酶提取和纯化的来源。
全酶可用于以测压法或比色法测定酪氨酸、苯丙氨酸和二羟基苯丙氨酸。Tashian (1957) 报道了基于此原理测定尿液中酪氨酸的方法。血浆苯丙氨酸也可以使用这种酶来测定。初的方法由 Udenfriend 和 Cooper (1953) 描述,修改已由 Hsia (1959) 和 Knox 和 Messinger (1958) 发表。Poisner (1960) 使用 Hsia 的方法测定了精神分裂症患者的血清苯丙氨酸水平,结果显着高于正常水平。
Boeker 和 Snell (1972) 对氨基酸脱羧酶进行了综述。另见 Snell 和 DiMari (1970)。
艾美捷Worthington 粪链球菌酪氨酸脱羧酶的特征:
佳 pH 值:5.5(Boeker 和 Snell 1972)。
特异性:L-苯丙氨酸和二羟基苯丙氨酸的作用速度比 L-酪氨酸慢得多。
抑制剂:重金属(Ag +、Cu 2+、Fe 2+、Fe 3+、Pb 2+)KCN、NHOH、N 2 H 4和SO 4=。
稳定剂:甘油 10-25%、巯基乙醇 (5 mM) 和 L-酪氨酸 (0.5 mM) (Chabner and Livingston 1970; Sundaresan and Coursin 1970)。
艾美捷Worthington酪氨酸脱羧酶测定方法:
此处使用的测定法基于 Gunsalus 和 Smith 的测定法(酶学方法,III,(Colowick, S. 和 Kaplan, N. 编辑),Academic Press, NY, 963, 1957)。在指定条件下,个单位在 37°C 和 pH 5.5 条件下每分钟从 L-酪氨酸 产生 1 微摩尔 CO 2 。
试剂:
1.0.8 M 醋酸钠,pH 5.5
2.0.074 M 醋酸钠,pH 5.5
3.0.0065 M L-酪氨酸在试剂水中。边搅拌边加热至 80°C 溶解。平衡至 37°C。(如果溶液冷却,可能会形成晶体)。
酶:
将酶溶解在 0.074 M 乙酸钠,pH 5.5 中,浓度为 2 mg/ml。在取出等分试样立即混合均匀。
程序:
将以下移液器移入 Warburg 烧瓶的主孔中:
0.8 M 醋酸钠,pH 5.5 0.2 毫升
0.0065 M L-酪氨酸,37°C 2.3 毫升
移取 0.5 ml 酶悬浮液到烧瓶的侧臂中。包括个不含酶的烧瓶作为空白,个不含酶的烧瓶作为空白,个装有 3.0 ml 试剂水的烧瓶作为热气压计。将烧瓶连接到压力计。平衡 10 分钟后,关闭压力计,倾倒并混合底物,然后更换浴中的烧瓶。
确定以大约 5 分钟间隔释放 30 分钟的 CO 2微摩尔数。绘制释放的微摩尔 CO 2与反应时间的关系,并从曲线的线性部分确定每分钟释放的微摩尔。
Worthington核心酶:包括:胶原蛋白酶,脱氧核糖核酸酶I,弹性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。
Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。