LI Silver增强方案：使用 LI Silver 进行凝胶染色轻松检测凝胶和印迹上 的 Nanogold® 标记分子

艾美捷 Nanoprobes LI Silver增强方案特色：

1.银增强剂凝胶染色：LI Silver

2.具体：仅开发 Nanogold® 标记带

3.快速：1-5分钟

4.敏感：比通常的凝胶染色剂更敏感

5.可直接用于凝胶或印迹转移

1.4 nm Nanogold® 粒子可以与银起显影，使它们变得肉眼可见，从而将信号放大数千倍。如果您使用 monomaleimido-Nanogold、mono-NHS-Nanogold® 或 mono-amino-Nanogold® 标记蛋白质或其他分子，则可以使用银增强剂在凝胶上轻松分析和检测。

以下是检测凝胶或印迹上 艾美捷 Nanoprobes Nanogold® 标记条带的方案：

1.用 Nanogold® 标记后，通过柱层析、蔗糖梯度或其他纯化方法去除未结合的金颗粒。在样品中留下过量的游离 Nanogold® 会干扰预期的凝胶染色。

2.像往常样运行凝胶，有两个预防措施：

A) Nanogold® 会被 β-巯基乙醇（或 DTT）降解，因此样品不得与还原剂混合，即必须运行非还原凝胶。其他成分（SDS 等）的正常浓度是可以接受的。

B) 样品不得加热。上样，样品经常在 SDS 中煮沸。由于 Nanogold® 在 50°C 以上会降解，因此不建议加热。这通常不是限制，因为大多数样品无需加热即可获得正常的凝胶图案。

3.如果需要，可以将凝胶电转移到硝酸纤维素上，但这不是必需的。

4.用几次去离子水冲洗凝胶。由于银显影剂会被卤化物沉淀，因此必须去除痕量的 NaCl。

5.将凝胶或印迹置于合适的培养皿中，并涂上足够的新鲜制备的 LI Silver（目录号 2013）以覆盖凝胶。LI 银是通过混合等量的 A 和 B 组分制备的。不要使用与 LI Silver 完全不同的常用凝胶银染剂，也不能有效地开发 Nanogold®。

6.观察应该呈现棕黑色的带的发展。未进入凝胶的含金聚集体或少量游离金可能会产生背景染色。通常的开发时间是 1-5 分钟。较长的显影时间（> 30 分钟）将导致仅由显影剂进行些非特异性背景自成核染色。

7.当达到佳染色时，通过在去离子水中冲洗来停止显影。后的染色凝胶现在是永久记录。

8.对于所有条带的比较和可视化，运行重复凝胶并用考马斯蓝或凝胶银染色剂染色。

9.由于 Nanogold® 颗粒的重量增加（约 15,000），Nanogold® 标记的分子在凝胶上的运行通常高约 15,000 MW。因此，标记和未标记的分子被分开，它们的比例可以通过显示总蛋白质含量的常用凝胶染色（考马斯或凝胶银染色）来估计。

文献参考：

1.Gregori, L., J. F. Hainfeld, M. N. Simon, ａnd D. Goldgaber. 1997. Binding of amyloid beta protein to the 20S proteasome. J Biol Chem 272 (1): 58–62

2，Wilkens, S. ａnd Capaldi, R.A. Monomaleimidogold labeling of the gamma subunit of the Escherichia coli F1 ATPase examined by cryoelectron microscopy. Arch Biochem. Biophys., 229, 105-109 (1992).

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来源：https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml