艾美捷worthington优化技术：细胞定量

为了有效地评估每个程序，量化每个解离步骤的结果非常重要。建议使用细胞计数室（血细胞计数器）进行产量定量，并使用台盼蓝进行活力定量。概述了使用血细胞计数器进行细胞产量定量；但是，此程序的新手可以参考更详细的讨论（参见 Freshney，动物细胞培养，第 227 页）。

艾美捷worthington细胞定量所需用品：

改进的 Neubauer 血细胞计数器

细胞兼容培养基或 BSS

巴斯德移液器或微量移液器

显微镜 (10X)

柜台

艾美捷worthington细胞定量程序：

1.用 70% 异丙醇仔细清洁计数室表面和血细胞计的盖玻片，并使其风干。小心不要刮伤这些表面。

2.用试剂水润湿盖玻片的侧面，并将盖玻片对准计数室。

3.使用巴斯德移液器或微量移液器取充分混合的 20-50 µl 等分的解离细胞悬液，仅将细胞吸入尖端。通过将移液器的尖端放在腔室边缘并让腔室通过毛细作用完全充满，立即将细胞悬浮液转移到计数室。不要过度或不足填充腔室。

4.对血细胞计数器另侧的第二个腔室使用另个等分样品重复此过程。

5.将血细胞计数器放在显微镜台上，并使用计数插图10X 物镜，注于计数室网格线。根据需要调整对比度以清楚地看到网格和分散的单元格。

6.通过缓慢移动滑块来调整字段区域，以获得由三条线包围的中心网格（见下图）。计算此 1 mm ²区域中存在的单元格总数，包括位于顶部和左侧边界上的单元格，不包括位于右侧和底部边界上的单元格。

7.为了准确计数至少 100-500 个细胞。根据产量和密度，可以计算更多或更少的面积。

8.重复第二个室的计数。如果不存在第二个腔室，则应清洁载玻片并重复该过程。

计算：

C = Ñ x 10 ⁴

其中 C = 每毫升细胞数

Ñ = 计数细胞数的平均值

10 ⁴ = 1 mm ₂的体积转换系数

总产量 = C x V

其中 V = 细胞总体积 (ml)

例子：

计数1 = 183 个细胞/mm ²

计数2 = 175 个细胞/mm ²

细胞体积 = 55 ml

C = 178.5 x 10 ⁴ = 1,785,000 个细胞/ml

总产量 = C x V = 1785,000 x 55 = 98,175,000 个细胞

注意：为获得佳效果，细胞密度应至少为每毫升10 ⁵ 个细胞。常见错误是由于在取样细胞悬浮液混合不当和/或在装载血细胞计数器计数室之允许细胞在移液管中沉淀。避免对多个细胞聚集体进行计数；聚集体的存在表明解离不完全，这可能需要进步优化分离参数。单细胞悬液提供佳结果。

Worthington注于高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。其核心酶产品包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml