显色底物用于比色检测。它们简单易用。适用于大多数免疫技术——从免疫组织化学到蛋白质印迹和 ELISA，它们提供了种J具成本效益的检测方法。

这期的主题是Jackson ImmunoResearch公司为大家讲解：Western Blot、IHC 和 ELISA 的显色检测。

显色底物可用于许多免疫组织化学应用，从 IHC 染色组织到蛋白质印迹。将显色底物添加到先与酶偶联抗体（通常是辣根过氧化物酶 (HRP) 或碱性磷酸酶 (AP)）孵育的印迹或组织中，将底物转化为有色沉淀物。通过简单地洗掉基板来阻止信号发展。沉淀物肉眼可见，在蛋白质印迹上，无需特殊设备即可检测为彩色条带。用于免疫组化 (IHC) 时，在正常光学显微镜下可以在组织上看到显色沉淀。

图 1：间接比色检测。A. 报告酶偶联二抗可检测目的蛋白的抗。B. 将显色底物添加到抗体-抗原复合物中。C. 报道酶偶联物催化显色底物转化为有色不溶性沉淀物，在印迹膜上肉眼可见。

、Jackson：溶解度

显色试剂可用于不同的报告酶、HRP、AP、GOD（葡萄糖氧化酶）和 β-Gal（β 半乳糖苷酶）。基材有不同的颜色和灵敏度。根据测定，可以选择可溶性或不溶性底物。

不溶于醇的色原适用于使用复染剂或封固剂的蛋白质印迹和 IHC。可溶性染料更适合 ELISA 和基于板的测定。

二、Jackson公司：Western印迹和斑点印迹

当用于蛋白质印迹或斑点印迹时，显色底物在膜上固定抗原抗体复合物的位置显示为彩色条带或斑点（图 2 和 3）。印迹可以显影，直到条带的信号达到所需的强度，这允许良好的灵敏度水平，因为可以直接观察印迹的发展，并且通过洗去底物立即停止反应。然后可以对显影的膜进行成像或存储以供后续使用。样品浓度低（低抗原）的样品可能需要延长显影时间，这可能导致背景较高、条带模糊。

三、Jackson公司：酶联免疫吸附试验

比色 ELISA 测量可溶性有色产品的光密度，该光密度通常与样品中存在的分析物的量成正比，从而可以对分析物进行相对定量。与其他免疫技术样，ELISA 需要优化时间和开发条件，以获得准确且可重复的测定。（图4）

四、Jackson公司：免疫组织化学

比色检测对于组织和细胞的免疫染色来说是种非常灵敏的方法。不同的底物提供不同的灵敏度和颜色以帮助识别，多种抗原识别是可能的，因为颜色可以与种底物和另种底物区分开来。有许多复染剂可用，可用于增加对比度，使 IHC 染色看起来更强。图 5 显示了3,3＇ 二氨基联苯胺（ DAB 染色）与细胞核的苏木精复染的棕色。

五、Jackson公司：报告酶（与抗体偶联）

J常见的偶联报告酶是来自辣根植物Armoracia rusticana的辣根过氧化物酶 (HRP)和来自小牛肠的碱性磷酸酶 (AP)，尽管来自大肠杆菌的葡萄糖氧化酶 (GOD) 和 ß-D-半乳糖苷酶也可以使用。HRP 和 AP 都根据应用要求提供不同的优势。HRP 是种 40 kDa 的小分子，通常以 4:1 的比例与抗体结合。它的小尺寸意味着良好的细胞内渗透性，并且不太可能引起抗原/抗体复合物的空间位阻。AP 稍大（86 kDa），可能会导致空间干扰，但底物转化反应是线性的，这可能意味着检测孵育时间可以延长，并且可能更敏感。AP 还消除了对具有高水平内源性过氧化物酶（HRP 中的个限制因素）的组织进行非特异性染色的可能性。

Jackson公司注于亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白研究，服务域覆盖各大学科研所和医院里的动物研究以及生物医学研究机构的科学家。艾美捷科技是Jackson公司的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml