艾美捷Worthington 提供两种制剂：种来自常规的P. testosteroni(ATCC 11966) 培养产生 α 和 β 酶，另种来自几乎完全产生 α 酶的突变菌株。通过使用两者，可以通过差异确定β-羟基类固醇。

艾美捷Worthington羟基类固醇脱氢酶技术说明：STDHP 和 STDH 同时包含 α 和 β 活性。然而，STDHMP 仅包含 α 活性。 

单位定义：个单位在 25°C、pH 9.0 下每分钟减少 1 微摩尔 NAD，使用雄酮或睾酮作为底物。

艾美捷Worthington羟基类固醇脱氢酶测定：

Method : 该测定是 Marcus 和 Talalay (1956) 的测定，其中反应速度被测量为由于 NAD 的减少而在 340 nm 处吸光度的增加。个单位在 25°C 和 pH 9.0 条件下每分钟减少 1 微摩尔 NAD，在特定条件下使用雄酮或睾酮作为底物。

试剂 :

0.03 M Tris⋅HCl 缓冲液，pH 7.2，含 0.001 M EDTA

0.166 M 焦磷酸钠缓冲液，pH 9.0

0.0043 M NAD 在试剂水中。注意：NAD 的盐形式和水合程度可能会有所不同。应小心使用分析和正确的分子量。

0.015% 雄酮。通过将 15 mg 雄酮溶解在 100 ml 无水甲醇中来制备。

0.015% 睾酮。通过将 15 mg 睾酮溶解在 100 ml 无水甲醇中来制备。

酶 :

将纯化的酶以 1 mg/ml 的浓度溶解在含有 0.001 M EDTA 的 0.03 M Tris⋅HCl pH 7.2 缓冲液中。还用这种缓冲液进行进步稀释。

粗酶：从细胞中提取酶可以通过用 0.001 M EDTA 对 0.03 M Tris·HCl 缓冲液（pH 7.2）中的 50 mg/ml 细胞悬浮液进行超声处理来完成。通过离心澄清并测定上清液。

对于测定，稀释酶以获得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。

程序 :

将分光光度计调整到 340 nm 和 25°C。

将移液器移入每个比色皿，如下所示：

0.166 M焦磷酸钠 0.6 毫升

0.0043 M NAD 0.2 毫升

试剂水 2.0毫升

酶 0.1 毫升

在分光光度计中孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并建立空白率（如果有）。在零时，加入 0.01 ml 睾酮溶液。记录 A 340 3-4 分钟。从曲线的初始线性部分计算每分钟 ΔA 340 。重复，使用雄酮作为底物。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml