右图：用 6x-His 标签克隆的来自腺病毒的旋钮蛋白，用 Ni-NTA-Nanogold 标记，从过量金中纯化的柱子，在扫描透射电子显微镜 (STEM) 中观察，未染色（全宽约 245 nm）。左图：Ni-NTA-Nanogold 的结构，显示了掺入的金属螯合物与 His 标签蛋白的结合。插图显示了分辨率，表示为从 Nanogold 粒子中心到 His 标签的距离：请注意，这明显短于抗体的等效距离。

这些特性使 HQ Silver 成为电子显微镜的理想选择，但由于天然增稠剂的存在，与其他些银增强试剂相比，这些成分更容易受到微生物污染，而且它们的粘性意味着可能需要使用更多小心使用该试剂。

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold™ 与传统抗体探针相比具有几个显着优势：

1.更好的渗透性：由于它非常小，NTA-Ni(II)-Nanogold 可以更容易地渗透到样品中并进入样品内的空间受限位点，并且对其超微结构的干扰更少。在某些系统中，它可以用于更强的固定或更少的透化，从而使标记具有更好的超微结构保存。

2.更高的标记分辨率。次氮基三乙酸 - Ni(II) 螯合物比抗体或蛋白质小得多，因此当它结合时，金更接近其目标。这使得 NTA-Ni(II)-Nanogold 非常适合以分子分辨率定位蛋白质复合物或其他大分子组装体中的位点。

3.NTA-Ni(II)-Nanogold 是使用改性金颗粒制备的，具有非常高的溶解度和稳定性。它的大小为 1.8 nm，很容易通过电子显微镜观察到。

新的 15nm 版本在 EM 下直接可见，无需金或银显影。

4.Ni(II)-NTA 的结合常数非常高，这是由于多个组氨酸结合的螯合效应和多个 Ni(II)-NTA 功能化的靶结合的结合。解离常数估计在10 -7到10 -13 M -1之间。对于许多应用，这提供了与抗体相当的结合强度。

应用包括：

对含有重组 His 标签蛋白的蛋白质、蛋白质复合物或细胞器进行高分辨率标记，用于 EM1 或 STEM2 定位。

光系统 II 的两个不同亚基的标记和分子定位。

组织切片中带His标签的蛋白质的“通用”预嵌入标记，用于电子显微镜观察。

在 Ni-NTA 柱纯化过程中识别馏分中的 His 标签蛋白。

检测印迹和凝胶中的重组 His 标签蛋白。

用于图像分析和结构求解的规则结构的重原子标记。

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold®已在低温电子显微镜中得到广泛应用。个例子，近篇关于革兰氏阴性菌多糖输出系统的综述，是Wzc 中结构域的定位，Wzc是种酪氨酸自激酶，在多糖的协调生物合成和分泌过程中起核心作用，构成保护膜的多糖。包封的大肠杆菌来自宿主免疫防御的细菌。荚膜由 K 抗原荚膜多糖形成：其组装和易位需要内膜和外膜中的蛋白质，而内膜蛋白 Wzc 起着关键作用：缺乏 Wzc 的突变体无法聚合高分子量的荚膜聚合物。Wzc 的同源物已在许多不同革兰氏阴性和阳性细菌的外聚合物生物合成系统中被鉴定出来，因此这种蛋白质的结构和功能具有相当大的意义。

艾美捷 Nanoprobes NTA-Ni(II)-Nanogold用于用N标记 Wzc-终端His标签（His6-Wzc）；Nanogold 标记既可用作重原子衍生物以帮助定相，也可用作高分辨率标记以确定膜内复合物的方向。比较使用和不使用 Nanogold 标记获得的分子包膜表明，用 NTA-Ni(II)-Nanogold 孵育的 Wzc 颗粒与没有 Nanogold 的颗粒基本相同，但很容易观察到多种金密度与蛋白质结合。使用较小的金标记数据集，生成了分辨率约为 22 Å 的第二个三维结构，该结构显示体积内包含额外的结合金密度。在两个位置发现了纳米金：在根部区域的上半部分，以及由牙冠下方的根部形成的空腔底部。第二个位置与蛋白质包膜没有物理连接，因此可能代表非特异性结合或捕获的金颗粒。然而，Nanogold 在任位置的存在表明根部含有N端，因此在细胞质中，而冠在周质中。

Nanoprobes注于免疫金标记和免疫测定试验域，为广大科研机构提供用于检测生物分子的灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml