、Jackson公司选择合适的封闭试剂：

蛋白封闭剂

封闭溶液的蛋白质成分应与被检测的抗原和二抗的种类相容。

牛血清白蛋白 (BSA) 和脱脂奶粉通常用于封闭溶液，因为它们既便宜又容易获得。然而，它们并不总是合适的，并且可能是背景的原因。

当使用针对来自牛或相关物种（如羊驼、山羊、马或绵羊）的抗体的抗体时，应避免使用 BSA 和脱脂奶粉。在许多 BSA 制剂中发现低水平的牛免疫球蛋白 G (IgG)。

建议使用来自标记二抗宿主物种的正常血清作为佳封闭剂，以避免任何不必要的相互作用。使用应制备新鲜的血清工作溶液，通常在浸入膜之在所选缓冲液中稀释至 5% w/v。

缓冲溶液

通常使用 pH 范围高于大多数抗体（pH 范围 7.5-8.5）的等电点 (pI) 的缓冲溶液，例如 Tris 缓冲盐水 (TBS) 或磷酸盐缓冲盐水 (PBS)。如果磷酸化蛋白是印迹的焦点，则不推荐使用 PBS。

这是因为抗可以与缓冲液中的磷酸盐以及靶蛋白结合。还应考虑缓冲液 pH 值对检测步骤中使用的报告酶（例如碱性磷酸酶）活性的影响。

非离子洗涤剂

非离子去污剂通常包含在蛋白质印迹中使用的缓冲液中。它们可以防止聚集，这本身会导致背景，但也可以绑定到可能导致非特定交互的任何站点。

Tween-20™（通常为 0.1%）通常用作缓冲添加剂。

二、Jackson公司孵化时间和洗涤

应确定实现佳信噪比所需的短可能阻塞持续时间。虽然在 4°C 下过夜封闭可能很有吸引力，但过度封闭孵育会导致聚集和细菌生长，这可能会导致背景或干扰可视化。

封闭过程可能需要通过改变组分及其浓度、时间和温度来进行优化，以获得低的背景和高的信噪比。

值得注意的是，在封闭后用不含其蛋白质成分的缓冲液清洗膜很重要，因为它可以改善抗对抗原表位的访问。（表1）

注意：有的阻塞解决方案 

有几种预配制的封闭溶液可供使用，它们在市场上销售时适用于所有实验条件。情况可能并非总是如此，尽管它们可能足以满足组条件。重要的是要考虑后续试剂的种类可能会排除使用通用封闭溶液，并且使用标记抗体种类的正常血清可能更可靠。

注意：用 BSA 或牛奶封闭

牛血清白蛋白 (BSA) 和奶粉可能含有牛 IgG。抗羊驼、抗牛、抗山羊、抗马和抗羊抗体会与牛 IgG 发生反应。使用 BSA 或奶粉进行封闭或稀释可能会显着增加背景和/或降低抗体滴度，应避免使用具有这些特异性的抗体；使用标记二抗宿主物种的正常血清 (5% v/v)。如果 BSA 被视为封闭剂，请使用不含 IgG 的试剂以降低背景电位。（表2）

Jackson公司注于亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白研究，服务域覆盖各大学科研所和医院里的动物研究以及生物医学研究机构的科学家。艾美捷科技是Jackson公司的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml