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高度富集、低输入-艾美捷m6A-RNA甲基化片段富集试剂盒
点击次数:0发布时间:2023/1/3 17:03:09
更新日期:2023/1/3 17:03:09
所 在 地:中国大陆
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例如,由于FTO突变患者的FTO活性增加,靶m RNA中m6A的异常低水平,通过一种未定义的途径,导致肥胖和相关疾病的发生。对RNA的化学M6A修饰的动态性和可逆性,也可作为一种具有深远生物学意义的新表观遗传标记。因此,更多有用的信息,以更好地理解m6A RNA甲基氧化RNA 转录物的水平和分布有利于疾病的诊断和治疗。
目,有几种方法被用于表位范围的m6A映射。这些方法包括MeRIP,PA-m6A-seq,miCLIP和m6A-CLIP。MeRIP已被广泛应用,但在m6A分析中无法实现高分辨率。PA-m6A-seq、mi CLIP和m6A-CLIP提高了分析分辨率,但由于重复性差和工艺复杂。特别是,这些方法耗时(>2天)和费用昂贵。为了解决这些问题,m6A RNA甲基化片段富集试剂盒来了~
艾美捷m6A-RNA甲基化片段富集试剂盒【简称:MeRIP试剂盒】有以下特点:
1、高度富集:使用RNA 切割酶混合物同时对含有m6A 的目标序列两端的RNA 进行片段化和切割/移除任何RNA 序列,而不影响被抗体占据的RNA 区域。短片段RNA 仅与抗m6A 抗体结合。因此,非常可靠地确定真正的m6A 富集目标区域,并可实现高分辨率绘图。
2、低输入:不结合的RNA 切割和免疫捕获是在同一个单管中处理的,这样可大限度地保护含有m6A的目标区域,并小化样本损失,允许输入RNA 低至500ng。
3、小背景:在含m6A 目标序列的两(2)端切割非结合RNA 序列,可小化MeRIP/测序背景,允许1000万读的数据分析。
4、超快速、精简程序: 从RNA 到cDNA 文库的过程小于3 小时,动手时间<30 分钟。
5、超方便: 本试剂盒包含了每一步所需的所有组件,这足以捕获含m6A 的RNA 序列,从而允许以一种很方便的方法来富集,结果可靠一致。
m6A-RNA甲基化片段富集试剂盒检测原则和程序:
EpiQuik™ CUT&RUN m6A RNA富集(MeRIP)试剂盒包含所需的所有必要试剂用于从总RNA开始成功地进行m6A RNA富集。在反应中,RNA切割/去除包含靶m6A的区域两端的序列
使用珠结合的m6A捕获抗体将含有m6A的片段下拉。富集的然后释放、纯化和洗脱RNA。试剂盒中包括非免疫IgG对照和m6A阳性对照。这些可用于证明试剂盒的功效和富集RNA定量或生物分析仪步骤。
图1:使用EpiQuik富集m6A RNA™ 切割并运行m6A RNA富集(MeRIP)试剂盒:捕获含有m6A的RNA片段通过抗m6A抗体(#A-1801,EpigenTek)从10µg人RNA和500ng阳性对照寡核苷酸。非免疫IgG用作阴性对照。富集的RNA是纯化并荧光定量用于富集倍数比较。
图2:文库片段的大小分布:m6A片段富集通过抗m6A抗体(#A-1801,EpigenTek)并用于cDNA文库制备。峰值195 bps反映m6A抗体结合的RNA插入大小(约55个基点)