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艾美捷 GFAP抗体(FC50001)操作事项
点击次数:0发布时间:2023/2/15 17:02:27
更新日期:2023/2/15 17:02:27
所 在 地:中国大陆
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详细内容
GFAP抗体已经被广泛证实仅识别星形胶质细胞(astrocyte,也称astroglia),而不识别神经细胞、成纤维细胞、少突胶质细胞(oligodendrocyte)以及肿瘤细胞等其它类型的细胞。因此GFAP抗体被广泛用于星形胶质细胞的免疫染色鉴定,也常用作星形胶质细胞Western检测时的参考检测以确认不同泳道的上样量是否相近。需要注意的是,GFAP在Schwann细胞和enteric glia中也可以被观察到。
艾美捷 GFAP抗体(FC50001)基本参数:
中文名称:GFAP抗体
英文名字:GFAP Antibody -W
cat#:FC50001
规格:200ul
应用类型:IHC
免疫原:这种抗体是多克隆抗体,在兔体内产生的肽序列是NAGFKETRASERAE(人、大鼠和小鼠),在注射到兔体内之,用戊二醛将其与甲状腺球蛋白偶联。
来源宿主:兔
反应性:人,大鼠
保存建议:小瓶中含有约200微升1/100稀释液。 抗体可在BSA稀释液(50 mM KPBS、0.4%Triton、1%BSA、1%NGS)中进一步稀释至至少1/20,000。 抗体应在-20 ℃下储存。 还包括吸附有用于封闭的特异性肽的滤纸。 可向管中加入500 μ l稀释的抗体以获得10 μ M阻断。 应用于组织,在室温(RT)下孵育至少1小时。 抗体特异性地与该肽阻断,而不与吸附在滤纸上的其他肽阻断。
GFAP抗体(FC50001)基本操作:
将新鲜冷冻的10-30微米切片在室温下固定在4%多聚甲醛(FA)中1小时磷酸盐缓冲盐水(PBS),并在PBS中与0.1-0.3%H2O2孵育10至30分钟。这个再次在PBS中洗涤组织,然后用Avidin/Biotin阻断试剂盒(Vector cat#SP-2001)处理,洗涤并在室温下用BSA稀释剂孵育1小时。将GFAP抗体(1/30000)应用于组织在室温下过夜。
在PBS中洗涤后,将切片在1/1000的生物素化GAR中孵育(Vector labs cat#BA1000)在室温下1小时,洗涤,然后在阿维丁/生物素中以1/1000(Vector labs cat#PK6100)在室温下1小时。洗涤后,用二氨基联苯胺(0.04%)在0.1M乙酸钠与0.06%H2O2混合六分钟(也可加入2.5%的氯化镍)。然后对切片进行水洗(如果需要,进行复染)、脱水并盖上盖子。
注意事项:
1. 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。