鸡白介素1β(IL-1β)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

l 本试剂盒仅供科研使用。

l 本试剂盒用于体外定量检测鸡血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中白介素1β(IL-1β)的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

实验原理

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡白介素1β(IL-1β)水平。用纯化的鸡白介素1β(IL-1β)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素1β(IL-1β)，再与HRP标记的白介素1β(IL-1β)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素1β(IL-1β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡白介素1β(IL-1β)浓度。

样本处理及要求

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

1. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

3. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5. 底物请避光保存。

6. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

7. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

试剂盒性能

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批间应分别小于9%和15%

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