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基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

产品说明

High5^TM系列BL21(AI) 感受态细胞是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r)，BL21(AI) 来源于BL21菌株，为膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。该酶的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。使用L-阿拉伯糖诱导araBAD启动子下游的蛋白表达。使用葡萄糖可以抑制araBAD启动子下游的蛋白表达。BL21(AI) 感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株体内的T7 RNA聚合酶水平能够进行有效调节，BL21(AI) 感受态细胞能够有效表达对其他BL21细胞有毒或生长抑制的蛋白。从BL21(AI) 菌株中获得目的重组蛋白产量，和其他BL21菌株产量相当。High5^TM系列BL21(AI) 感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达10⁸cfu/μg。

操作方法

1. 取100μl冰上融化的BL21(AI)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含50 µg/ml四环素及所选质粒筛选抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意：

1. Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中，而pCP20转化到其他菌株中都很正常，但是菌体原因未知。

2. 即使不加葡萄糖，BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低，加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。

注意事项

1. 感受态细胞在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少*终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，*佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下：

1. 使用T7启动子载体（高拷贝或者低拷贝都可以）进行蛋白表达。

2. 使用其他BL21进行蛋白表达时，观察到明显的细菌生长的抑制作用。

3. 表达一个已知的毒性蛋白。