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免疫细胞化学固定剂
点击次数：258 发布时间：2016/4/6 14:37:05
大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。
目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛*为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。
1、4%多聚甲醛-0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）
试剂：多聚甲醛 40 g
0.1 mol/L磷酸缓冲液 至1000 ml
配制方法：称取40 g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800 ml 0.1 mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60 ℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1 N NaOH才能使溶液清亮，*后补足0.1 mol/L的PB于1000 ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24 h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠
试剂：A液 多聚甲醛40 g、蒸馏水400 ml
B液 Na2HPO4·2H2O 16.88 g、蒸馏水300 ml
C液 NaOH3.86 g、蒸馏水200 ml
配制方法：A液在500 ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1 N NaOH或1 N HCl 将pH调至7.2～7.4，*后，补充蒸馏水至1000 ml充分混合，4 ℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4 ℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
3、Bouin＇s液及改良Bouin＇s液
试剂：饱和苦味酸 750 ml
40%甲醛 250 ml
冰醋酸 50 ml
配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），*后加入冰醋酸，混合后存于4 ℃冰箱中备用。冰醋酸在临用前加入。改良Bouin＇s液即不加冰醋酸。
该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。
原创作者：上海抚生实业有限公司
