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ELISA试剂盒洗涤液中的非离子
点击次数：150 发布时间：2016/4/20 15:54:41
但却也决定着实验的成败。elisa试剂盒就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA试剂盒操作中，洗涤是*主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。洗涤的方式除某些ELISA试剂盒仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种，
(1)浸泡式a.吸干或甩干孔内反应液;b.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去);c.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短;d.吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;e.重复操作c和d，洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
(2)流水冲洗式流水冲洗法*初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为彻底，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。在ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。
CRABP2细胞维甲酸结合蛋白2抗体
C2orf802号染色体开放阅读框80抗体
phospho-CD32B(Tyr291)磷酸化CD32B抗体
Complement C3过敏毒素C3（补体C3）抗体
CD66c癌胚抗原相关细胞粘附分子抗体
CPEB1细胞质多聚腺苷酸结合蛋白1抗体
CST7半胱氨酸蛋白酶抑制剂7抗体
C22orf2922号染色体开放阅读框29抗体
Contactin-1神经细胞表面蛋白F3
Cathepsin C/DPP1组织蛋白酶C抗体
Caspase 4半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗体
caspase-3 p12 subunit活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3抗体
C7ORF617号染色体开放阅读框61抗体
Claudin 11少突胶质细胞跨膜蛋白抗体
CD80刺激分子B7-1蛋白抗体
C5b-9末端补体复合物抗体
C8orf558号染色体开放阅读框55抗体
C4a+C4b补体C4a+C4b蛋白抗体
原创作者：上海抚生实业有限公司
