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如何正确检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核
点击次数：282 发布时间：2016/12/21 10:40:20
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验对象
成年健康小鼠，体重25g左右，雌雄均可。
实验试剂与器材
（1）器材：显微镜、低速离心机、电子天平、解剖器械（搪瓷解剖盘、探针、剪刀、镊子）、注射器、试管、试管架、磨口试剂瓶、滴管、染色缸、洗耳球、量筒、清洁载玻片。
（2）试剂：0.9％生理盐水、灭活的小牛血清、环磷酰胺、甲醇、PBS (pH6.8)、Giemsa染液、瑞氏染液。
实验方法与步骤
（1）环磷酰胺处理：取骨髓前24h先给小鼠腹腔注入环磷酰胺，注射剂量为100mg／kg动物体重。
（2）取骨髓：用损伤脊髓法处死小鼠，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨，用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后用注射器吸取5ml生理盐水，插入股骨一端，将骨髓细胞冲洗至10ml的离心管中。可重复冲洗多次，直至骨髓腔呈白色为止。
（3）离心处理：将所获得的细胞悬浮液以 1000rpm离心10min，吸去上清液，在沉淀物中加入2滴灭活的小牛血清，制成细胞悬液。
（4）涂片：滴一滴悬液于载玻片一端，按常规方法涂片，在空气中晾干。
（5）固定：将晾干的载玻片放入甲醇固定液中10min，取出晾干。
（6）染色：将制片平放在玻璃板上，用1∶9∶10的 Giemsa∶PBS∶瑞氏染液，染色15min，流水冲洗后晾干即可镜检。
（7）观察：嗜多染红细胞为年幼红细胞，呈灰蓝色，略大于红细胞（红色），微核多呈圆形和椭圆形，呈蓝紫色或紫红色。
（8）结果分析：在显微镜下，每只小鼠骨髓涂片标本计数1000~2000个嗜多染红细胞，包括其中出现微核的细胞数，将结果填入表内，并计算微核细胞率，观察记录结果。
按100mg/kg体重剂量给小鼠腹腔注射环磷酰胺，其嗜多染红细胞微核率为（48.9±3.6）％。正常小鼠嗜多染红细胞微核率为5‰以下，超过5‰为异常。
实验原理
染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。大小应为主核的1/20～1/5。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。微核率是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，所以可用简易的、快速、灵敏的微核计数来代替繁杂的畸变染色体计数。Matter 和Schmid建立的微核测试是一种比较理想的方法，目前国内外已把微核测试用于辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核
草酸酰胺乙酯CAS号：617-36-7进口、组装
2,4-二甲基-2-戊醇CAS号：625-06-9进口、组装
4-氨基-N-甲基苯甲酰胺CAS号：6274-22-2进口、组装
CAS号：63421-69-2进口、组装
反式-4-丙基环己基苯甲酸CAS号：65355-29-5进口、组装
2-氯-5-甲基烟酸CAS号：66909-30-6进口、组装
4-二甲氨基苯酚CAS号：619-60-3进口、组装
1-甲基环丙烷-1-甲酸甲酯CAS号：6206-25-3进口、组装
2-甲基3-(三氟甲基)苯甲酸CAS号：62089-35-4进口、组装
对-甲乙苯CAS号：622-96-8进口、组装
4-氯-2-甲基-6-硝基苯胺CAS号：62790-50-5进口、组装
alpha-氨基-gamma-丁内酯 氢溴酸CAS号：6305-38-0进口、组装
3-氯-1-甲基-1H-吡唑CAS号：63425-54-7进口、组装
4-羟基-2-巯基-5-甲基嘧啶CAS号：636-26-0进口、组装
2-氟-5-甲基苯酚CAS号：63762-79-8进口、组装
原创作者：上海抚生实业有限公司
