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酵母细胞质粒的提取方法
点击次数：310 发布时间：2017/3/6 13:24:52
酵母细胞质粒提取步骤
1. 接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。
2.第二天取一滴菌液于进行显微镜下观察,目镜用16,物镜用40倍观察细胞壁破碎前的状态,其成杆状,流动性比较下.
3.取10ml的培养酵母菌液,5000g离心3min,弃上清液.加入5ml的1倍TE悬浮.
4.将悬浮液倒入高压破壁仪的样品管中,利用高压破碎机进行破碎细胞壁,压力加到20Mpa,停留15s,降压,反复来回压3次.取出细胞液,取一滴于显微镜下观察,如果细胞呈不规则的球状时,而且其流动性 比较大,说明其细胞壁已经破碎成为原生质体.
5.取2个EP管,每管加入1.5ml上述的细胞液,12000g离心5min,收集原生质体.弃取上清液,每管加入300ul10%的SDS溶液,混匀冰浴5min,进行破原生质体.
6.然后加入150ul的tris饱和酚,和150ul的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1),混匀,12000g,离心10min.
7.将水相移到另一EP管中,加入等体积的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1), 混匀,12000g,离心10min.
8. 将水相移到另一EP管中,加入1/10体积的3M KAC溶液和2倍体积的无水乙醇,放入-20℃冰箱中
9.1h,12000g离心10min,倒出乙醇,等干燥后加入1ml的70%的无水乙醇,混匀,12000g,离心10min.
10.弃去乙醇,等室温干燥后,每管加入20ul的TE溶液(如要去处RNA酶,加入1ul的100mg/ml浓度的RNA酶),放入-20℃冰箱即可.
11.跑电泳进行检测是否从酵母菌中提出质粒了.
134993-88-73,5-二氟苯肼盐酸盐
13506-76-82-甲基-6-硝基苯甲酸
13508-96-82-甲基-4-硝基吡啶
135145-90-32,5-二氯苯硼酸
13519-90-94-氟间苯二氰
135-20-6铜铁试剂
13534-99-12-氨基-3-溴吡啶
135427-08-64-氟-3-甲基苯甲醛
13544-44-02,4-二氯-5-碘嘧啶
135484-83-22-氨基-4-溴苯甲酸甲酯
13567-39-0环氧柏木烷
135884-31-01-Boc-吡咯-2-硼酸
135-97-7beta-托品醇
13600-42-53-氰基-2,6-二氯-4-(三氟甲基)吡啶
13600-43-63-氰基-4-三氟甲基吡啶
13623-94-41,1-双(甲硫基)-2-亚硝基乙烯
136285-67-12-[[(2＇-氰基联苯-4-基)甲基]氨基]-3-硝基苯甲酸乙酯
136434-34-9盐酸度洛西汀
136434-77-01-溴-2-氟-4-碘苯
136496-72-54-羧基-3-氯苯硼酸
13650-49-2N＇-BOC-L-鸟氨酸;N＇-叔丁氧羰基-L-鸟氨酸
原创作者：青县重缝机械厂
