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冷冻切片的具体操作
点击次数：278 发布时间：2017/3/10 14:32:36
冷冻切片
1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5 ～10μm间。
4、调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带 ,可避免组织摊片过程中皱折 ,保证组织结构的完整及切片的美观。
注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或 OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。）
②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
③冷冻箱及冷冻头的温度高低，要根据不同的组织而定。温度过低会导致组织块过硬,切片碎裂,出现梯田状薄厚不均或空洞;反之,温度过高,组织块硬度不够 ,切片不易成形或成皱褶。数据图1供参考。
④当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。
⑤用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。
A-001阿魏酸松柏酯coniferyl ferulate63644-62-2≥98.5%HPLC
A-002阿魏酸4-羟基-3-甲氧基桂皮酸、4-羟基-3-甲氧基肉桂酸4-Hydroxy-3-methoxycinnamic acid1135-24-6＞98%RP-HPLC:甲醇：水（40:60）（磷酸PH3.5） λ：320nm(仅供参考）
A-003桉油精欧卡那卜托;桉树脑;桉叶油醇、1,8-桉树脑;1,8环氧对孟烷Cineole470-82-6＞98%HPLC
A-004安石榴苷安石榴甙Punicalagin65995-63-3＞98%RP-HPLC:甲醇：冰醋酸水溶液(50：50)λ：280nm(仅供参考）
A-005阿魏酸乙酯4-羟基-3-甲氧基肉桂酸乙酯、4＇-羟基-3＇-甲氧基肉桂酸乙酯Ethyl 4＇-hydroxy-3＇-methoxycinnamate4046-02-0＞98%HPLC
A-006阿魏酸钠3-甲氧基-4-羟基肉桂酸钠Sodium ferulic24276-84-4＞98%HPLC
A-007澳洲茄碱茄解碱Solasonine19121-58-5＞98%HPLC
A-008澳洲茄边碱奥洲边茄碱Solamargine20318-30-3＞98%HPLC
A-009澳洲茄胺茄解啶、澳洲茄次碱;茄解定Solasodine126-17-0＞98%HPLC
A-010β-桉叶醇Β-桉叶醇β-Eudesmol51317-08-9＞98%HPLC
A-011艾黄素Artemisetin479-90-3＞98%HPLC
A-012D-阿拉伯糖醇阿东糖醇;侧金盏花醇;核糖醇;侧金盏糖醇;侧金盏戊糖醇;福寿糖醇;侧金盏糖醇;福寿草醇Adonito488-81-3＞98%HPLC
A-014阿卡波糖抑葡萄糖苷酶Acarbose56180-94-0＞98%HPLC
原创作者：上海抚生实业有限公司
