大肠杆菌 / 大肠菌群显色培养基用途:用于快速、准确同时检测大肠杆菌和大肠菌群,培养24小时,大肠杆菌显蓝绿色-紫色,大肠菌群显红色
大肠杆菌 / 大肠菌群显色培养基是用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌和大肠菌群的快速检测。大肠杆菌显蓝色至紫色,大肠菌群显红色。
成份 (g/L)
特殊营养物质 | 28.19 |
混合显色剂 | 0.31 |
琼脂 | 13.0 |
pH 6.8 ± 0.2 25 ℃ |
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得*佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 41.5g 加入 1000ml 蒸馏水,加热溶解并不停搅拌,煮沸不要超过 1 分钟。取 1ml 制备好的样品液加入直径为 9cm 无菌平皿中心,倾入冷却至 45-50 ℃培养基约 15ml ,混匀,凝固后,再加入一层培养基进行履盖。或冷却至 45-50 ℃时,倾入无菌平皿,琼脂完全凝固后,在 37 ℃的培养箱中倒置放置 1-2 小时,加入适当稀释度的样品液 1ml ,涂布于培养基上, 36 ± 1 ℃培养 18 ~ 24h 。
贮存
制备好的平板应立即使用,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度 2-8 ℃,注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1 、按国家标准、 SN 标准、 FDA 标准或其它方法制备样品液
2 、取样品液 1ml 加入 冷却至 45-50 ℃显色培养基中混匀或 涂布于平板上
3 、 36 ± 1 ℃培养 18 ~ 24h ,选用有 30 ~ 200 个菌落的平板,计数平板上出现的典型大肠菌群和大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色,大肠菌群为粉红色菌落,其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠菌群 = 蓝色菌落 + 紫色菌落 + 粉红色菌落
大肠杆菌 = 蓝色菌落 + 紫色菌落
4 、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上, 36 ± 1 ℃培养 12-16 小时,挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验 ( 本公司有生化鉴定管套装 20 支 x3 种 )
质量控制
1 、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈淡红色。制备好的平板呈透明粉红色固体培养基。
2 、微生物试验
在 36 ± 1 ℃培养 18 ~ 24h 小时:
质控菌株 | ATCC | 生长情况 | 菌落颜色 |
单增李氏菌 | 27853 | -/+ | 无色 |
金黄色葡萄球菌 | 25923 | -/+ | 无色 |
大肠杆菌 | 25922 | +++ | 蓝色 |
沙门氏菌 | | +++ | 无色 |
大肠菌群 | | +++ | 粉红色 |
方法的局限性
本培养基鉴定 大肠菌群 / 大肠杆菌,少数情况下可能会出现假阳性,但不会出现假阴性,有时可能需做其它补充试验。
典型特征
大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色,大肠菌群为粉红色菌落,其它细菌为无色菌落。
大肠杆菌 / 大肠菌群显色培养基的成分:
组织培养过程中,外植体生长所需的营养和生长因子,主要是由培养基供应的。因此,培养基中应包括植物生长必需的16种营养元素和某些生理活性物质。所有这些物质,可概括为5大类:
1.无机营养物 植物生长必须的有13种元素:氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)、铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)、钼(MO)、氯(Cl)。前六种属大量元素,后七种属微量元素。培养基的各种盐类中均含有上述这些元素。
无机氮可以两种形式供应,即硝态氮和铵态氮。有些培养基以硝态氮为主,另一些以铵态氮为主,多数二者兼而有之。
铁往往以无机铁供应,如硫酸亚铁,为了防止沉淀,目前皆用螯合铁,即硫酸亚铁加乙二胺四乙酸钠配成。
2.有机物质 主要有两类:一是作为有机营养物质,为植物细胞提供碳、氢、氧、氮等必要元素,如糖类(蔗糖、葡萄糖和果糖)、氨基酸及其酰胺类(如甘氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺);另一类是一些生理活性物质,在植物代谢中起一定作用,如硫胺素(B1)、吡哆醇(B6)、烟酸、生物素、肌醇、单核甘酸及其碱基等。
3.主要加入植物天然的五类激素物质及其人工合成的类似生长激素物质,如生长素中常用的吲哚乙酸、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、吲哚丁酸;细胞分裂素中常用的有激动素、6-苄基氨基嘌呤、玉米素;赤霉素类中常用的有赤霉酸;乙烯类中常用的有乙烯和乙烯利。
4.其他附加物 这些物质不是植物生长所必需的,但对细胞生长有益。
琼脂(agar)是固体培养基的必要成分,琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物,本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中,成为溶胶,冷却至40℃即凝固为固体状凝胶。通常所说的“煮化”培养基,就是使琼脂溶解于90℃以上的热水。琼脂条的用量在6—10g/L之间,琼脂粉的用量在3—4g/L之间若浓度太高,培养基就会变得很硬,营养物质难以扩散到培养的组织中去。