液体硫乙醇酸盐培养基用途:用于产气荚膜梭菌确证试验的细菌培养(GB.SN标准)
液体硫乙醇酸盐培养基配方:(g/L) |
酪胨(胰酶水解) 酵母浸出粉 葡萄糖 硫乙醇酸钠 L-胱氨酸 氯化钠 刃天青 琼脂 pH值7.1 ± 0.2 | 15.0 5.0 5.0 0.5 0.5 2.5 0.001 0.75 25℃ |
液体硫乙醇酸盐培养基原理: |
酪胨和酵母出粉提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖提供可发酵有糖类更利于生长;氯化钠维持均衡的渗透压;硫乙醇酸钠和L—胱氨酸能有效降低氧化还原电位,防止过氧化物的积累对某些菌产生毒性,同时其硫氢基团有钝化含砷、汞及其它重金属防腐剂的抑菌作用;少量琼脂的凝固作用可防止二氧化碳、氧气和还原产物的扩散;刃天青是氧化还原指示剂,氧化状态呈粉红色,还原状态无色 |
液体硫乙醇酸盐培养基用法: |
称取本品 29.25g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装适宜容器 ,其装量与容器高度的比例 应符合,培养结束后培养基氧化层 ( 粉红色 ) 不超过培养基深度 的 1/2 。121℃高压灭菌 15 分钟迅速冷却。在供试品接种前, 培养基氧化层高度不得超过培养基深度的 1/5 。否则,须经100℃水浴加热至粉红色消失( 不得超过 20 分钟 ),迅速冷却 , 只限加热一次,并应防止被污染。 |
液体硫乙醇酸盐培养基质量控制: |
在36±1℃培养24-120小时。 质控菌株 | 菌株编号 | 生长情况 | 其它特征 | 金黄色葡萄球菌 | CMCC(B)26003 | +++ | / | 铜绿假单孢菌 | CMCC(B)10104 | +++ | / | 枯草芽孢杆菌 | CMCC(B)63501 | +++ | / | 生孢梭菌 | CMCC(B)64941 | +++ | / | |
液体硫乙醇酸盐培养基的成分:
组织培养过程中,外植体生长所需的营养和生长因子,主要是由培养基供应的。因此,培养基中应包括植物生长必需的16种营养元素和某些生理活性物质。所有这些物质,可概括为5大类:
1.无机营养物 植物生长必须的有13种元素:氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)、铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)、钼(MO)、氯(Cl)。前六种属大量元素,后七种属微量元素。培养基的各种盐类中均含有上述这些元素。
无机氮可以两种形式供应,即硝态氮和铵态氮。有些培养基以硝态氮为主,另一些以铵态氮为主,多数二者兼而有之。
铁往往以无机铁供应,如硫酸亚铁,为了防止沉淀,目前皆用螯合铁,即硫酸亚铁加乙二胺四乙酸钠配成。
2.有机物质 主要有两类:一是作为有机营养物质,为植物细胞提供碳、氢、氧、氮等必要元素,如糖类(蔗糖、葡萄糖和果糖)、氨基酸及其酰胺类(如甘氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺);另一类是一些生理活性物质,在植物代谢中起一定作用,如硫胺素(B1)、吡哆醇(B6)、烟酸、生物素、肌醇、单核甘酸及其碱基等。
3.主要加入植物天然的五类激素物质及其人工合成的类似生长激素物质,如生长素中常用的吲哚乙酸、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、吲哚丁酸;细胞分裂素中常用的有激动素、6-苄基氨基嘌呤、玉米素;赤霉素类中常用的有赤霉酸;乙烯类中常用的有乙烯和乙烯利。
4.其他附加物 这些物质不是植物生长所必需的,但对细胞生长有益。
琼脂(agar)是固体培养基的必要成分,琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物,本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中,成为溶胶,冷却至40℃即凝固为固体状凝胶。通常所说的“煮化”培养基,就是使琼脂溶解于90℃以上的热水。琼脂条的用量在6—10g/L之间,琼脂粉的用量在3—4g/L之间若浓度太高,培养基就会变得很硬,营养物质难以扩散到培养的组织中去。