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技术文章
Elisa常见样本的处理方法
点击次数:3051 发布时间:2017/4/20 18:37:16
Elisa 是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法,样本的处理对于 Elisa 实验的成功有着举足轻重的作用。样本收集的时间、处理方法和保存都会 影响到 Elisa 实验的结果。上节我们介绍了血液(血清、血浆),组织匀浆、细 胞裂解液、细胞培养上清等常见样本的处理方法,这一节我们将会介绍皮肤组 织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴 道分泌物等特殊样本的处理方法,供研究者参考。
1、痰液
1)选择痰液中较为粘稠部分称重,加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇), DTT 的主要作用是溶解粘液,用吸管反复吹打,漩涡器振荡 15s,37 度恒温水 浴振荡 5 分钟;
2)加入两倍于痰量的 PBS 缓冲液继续振荡 15-20 分钟,150 目的金属丝网 过滤,1500 rpm 离心 10 分钟吸取上清液检测。
2、粪便
尽量采集干的粪便,粪便过稀会较难处理且降低检测的准确性。采集的重 量应大于 50 mg,将粪便用 PBS 洗 3 次(*终粪便质量:PBS 体积=1:9),用超 声粉碎(或捣碎)后于 5000×g 离心 10 分钟,取上清检测。
3、唾液
将样品收集于离心管后在-70 度冰冻 1 小时。在冰上融化样品后,2000×g 离 心 10 分钟,取上清检测。
4、 精浆
将精液收集于无菌容器中,正常精液射出体外呈稠厚的胶冻状,射出体外 后需在室温或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纤维蛋白溶解酶的作用下液 化,变的稀薄。待精液完全液化后,将精液 4000 rpm 离心 10 分钟分离精浆进 行检测。
5、 皮肤组织
用匀浆机加冰的 PBS 研磨 20-50 mg 的皮肤组织使其充分溶解,离心 20 分 钟,10000 g/分钟,取上清检测。
6、 牛乳
于 4 度,12000g/分钟离心 30 分钟,去除上层脂肪,以及下层沉淀,取中 间层样本用于检测。
7、 脑脊液、肺泡灌洗液
样本收集后于 1000×g 离心 20 分钟,离心后收集上清,并将标本保存于-20 度,且应避免反复冻融。
处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故 该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融, 样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月, -80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。 样本的处理是实验成功的步,以上就是关于 Elisa 特殊样本处理方法的简述, 供研究者参考。
原创作者:上海信裕生物科技有限公司