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技术文章

ELISA试剂盒在实验中的留心事项

点击次数:2995 发布时间:2017/6/6 20:57:20

 elisa试剂盒在实验中的留心事项
ELISA试剂盒在ELISA实验中的留意事项分为两个关键:
一、做好对照
正式实验时,应别离以阳性对照与阴性对照操控实验条件,待检样品应作一式二份,以确保实验成果的精确性。有时本底较高,阐明有非特异性反响,可选用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
二、实验条件的挑选
在ELISA中,进行各项实验条件的挑选是很重要的,其间包括:
(1) 固相载体的挑选:很多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在运用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反响,调查其显色反响是不是均一性,据此判明其吸附功能是不是杰出。
(2) 包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,请求纯度要好,吸附时一般请求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的*适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相一起,调查阳性标本的OD值。挑选OD值而蛋白量起码的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。
(3) 酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采纳“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶符号抗体别离为不一样的稀释度)在正式实验体系里精确地滴定其作业浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选请求是价廉、安全、有明显地显色反响,而自身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果,应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是现在较为满足的供氢体。底物效果一段时刻后,应参加强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻,以10-30分钟为宜。底物运用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前参加。

原创作者:上海信裕生物科技有限公司

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