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NCI-H661 [H661]; 人大细胞肺癌细胞(2021年新引进)
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详细内容
NCI-H661 [H661]; 人大细胞肺癌细胞(2021年新引进)
描述 Description | 此细胞株源自一位45岁患有大细胞肺癌的白人男性的淋巴结。该细胞缺乏产生粘液和鳞状分化的亚显微结构和生化证据。其表达的p53 mRNA与正常肺细胞的表达量相近,且易于检测。此外,没有表现出明显的结构DNA异常。该细胞角蛋白和波形蛋白表达阳性,神经丝三联体蛋白阴性。每个批次均通过本库支原体检测,结果为阴性。经本库STR检测无误。STR鉴定结果为:Amelogenin: X,Y;CSF1PO: 10;D13S317: 11;D16S539: 11;D5S818: 12;D7S820: 8,12;TH01: 9.3;TPOX: 8;vWA: 17,18。 |
动物种别 Organism | 白人 |
性别 Gender | 男性,45岁 |
细胞货号 | XY-H044 |
细胞别名 | NCI-H661 [H661] |
组织来源 Tissue and Cell Type | 肺;来源于转移部位:淋巴结 |
形态 Morphology | 上皮样,贴壁生长 |
培养基和添加剂 Complete Growth Medium and Culture Conditions | 人大细胞肺癌细胞NCI-H661 [H661] 完全培养液配方(100 ml): RPMI 1640 Medium (Invitrogen, 11875-093) 88 ml FBS (Gibco) 10 ml Glutamax (Invitrogen, 35050061) 1 ml Sodium Pyruvate 100 mM Solution (Invitrogen, 11360070) 1 ml 参考传代比例:1:3 参考传代周期:3~5天 参考换液频率:每周2次 冻存液配方:完全培养液95%,DMSO 5% |
供应限制 Permits and Restrictions | A。仅供研究之用。 |
二、细胞培养操作
1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
a、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
b、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
c、弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
d、待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
b、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
c、用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
d、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,用新鲜的完全培养基重悬 细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞 的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议 1:2 传代 。
9. 注意: 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。