数量：大量
保质期：一年
保存条件：4℃保存
规格：50次
microRNA（miRNA）和RNA干扰研究是当今分子生物学研究的一大热点，但快速分离和纯化相关的小RNA十分棘手，是目前研究miRNA的主要障碍技术。本产品直接从纯化好的总RNA中富集其中的小RNA，它具有下列特点：
1. 柱式法从总RNA中直接分离纯化小RNA。得到的小RNA长度大部分在200 nt以下，包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 操作简单快速，整个过程只需要约10分钟。
3. 小RNA纯净，OD260/280一般在1.9以上。
4. 可用于RT-PCR、miRNA标记、microarray等后续实验。

我准备按照你提供的基本程序尝试一次。沉淀法MIRNA分离试剂盒还需要问的问题是：

1.洗涤包含体，实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀，对吗？我将沉淀-20度保存，应该没有什么影响吧？另外，我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF，是蛋白酶抑制剂，它是否对目的蛋白有影响呢？

2.尿素洗涤包含体，洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE，得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。沉淀法MIRNA分离试剂盒洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗？但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗？这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗？

3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶，不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲，而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素，对复性有影响吗？

不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我，我再仔细看看。

沉淀法MIRNA分离试剂盒技术回答：

1）包含体在-20度或-70度保存较好，包含体状态的蛋白稳定性好，一但复性成功，溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF，是蛋白酶抑制剂，应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF，加与不加看你的蛋白的稳定性。

2）洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀，用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬，与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况，沉淀法MIRNA分离试剂盒选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。

3）用Tris配尿素，OK! 

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ZT105-2冷抑制热启动HotStart Taq DNA Polymerase500UZOMANBIO

ZT105-3冷抑制热启动HotStart Taq DNA Polymerase2500UZOMANBIO

ZT106-110x JumpStart Buffer 热启动缓冲液(不含酶）1 mlZOMANBIO

ZT106-210x JumpStart Buffer 热启动缓冲液(不含酶）5 mlZOMANBIO

ZT107-12 x SYBR Green qPCR Mix (荧光定量PCR）50 次x 50μl反应体系ZOMANBIO

ZT107-22 x SYBR Green qPCR Mix (荧光定量PCR）200 次x 50μl反应体系ZOMANBIO

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