柱式真菌RNAout
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原代细胞
细胞系
分子生物学
生化试剂
标准品/对照品
详细内容
柱式真菌RNAOUT
数量:大量
保质期:一年
保存条件:4℃保存
规格:50次
本产品是在本公司真菌RNAOUT(CAT#:60305)基础上改进的柱式产品,跟真菌RNAOUT相比,它具有下列特点:
1. 柱式操作,更加简单快捷,整个过程只需要约30分钟。
2. RNA纯度高,OD260/280一般都在2.0左右,可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。
3. RNA产量高,一般在20-70 μ g/mL酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)
4. 非酶细胞破裂法,适用于各种形态的真菌和各个种属的真菌,包括Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris等。
我准备按照你提供的基本程序尝试一次。柱式真菌RNAOUT还需要问的问题是:
1.洗涤包含体,实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀,对吗?我将沉淀-20度保存,应该没有什么影响吧?另外,我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF,是蛋白酶抑制剂,它是否对目的蛋白有影响呢?
2.尿素洗涤包含体,洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。柱式真菌RNAOUT洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗?但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗?这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗?
3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶,不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲,而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素,对复性有影响吗?
不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我,我再仔细看看。
柱式真菌RNAOUT技术回答:
1)包含体在-20度或-70度保存较好,包含体状态的蛋白稳定性好,一但复性成功,溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF,是蛋白酶抑制剂,应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF,加与不加看你的蛋白的稳定性。
2)洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀,用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬,与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况,柱式真菌RNAOUT选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。
3)用Tris配尿素,OK!
ZD310-02ECL底物发光试剂盒(试剂A:50ml,试剂B:50ml)100mlZOMANBIO
ZD311-01可溶型TMB显色底物试剂100mlZOMANBIO
ZD311-02可溶型TMB显色底物试剂500mlZOMANBIO
ZD312-01沉淀型TMB显色底物试剂100mlZOMANBIO
ZD312-02沉淀型TMB显色底物试剂500mlZOMANBIO
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特殊蛋白质提取试剂盒
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