凝胶法MIRNA分离试剂盒

 数量：大量
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规格：50次

我准备按照你提供的基本程序尝试一次。凝胶法MIRNA分离试剂盒还需要问的问题是：

1.洗涤包含体，实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀，对吗？我将沉淀-20度保存，应该没有什么影响吧？另外，我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF，是蛋白酶抑制剂，它是否对目的蛋白有影响呢？

2.尿素洗涤包含体，洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE，得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。凝胶法MIRNA分离试剂盒洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗？但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗？这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗？

3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶，不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲，而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素，对复性有影响吗？

不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我，我再仔细看看。

凝胶法MIRNA分离试剂盒技术回答：

1）包含体在-20度或-70度保存较好，包含体状态的蛋白稳定性好，一但复性成功，溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF，是蛋白酶抑制剂，应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF，加与不加看你的蛋白的稳定性。

2）洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀，用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬，与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况，凝胶法MIRNA分离试剂盒选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。

3）用Tris配尿素，OK! 

 3090-250 固相RNase清除剂 250ml

3091-1.5 液相RNase清除剂 1.5ml

Oct-10氧钒核糖核苷复合物（RVC） 10ml

3100-1.5 RNA长效保存液 1.5ml

3290-400 RNase抑制剂 400U

3290-2500 RNase抑制剂 2500U

RNA样品污染清除

60201-1.5 非酶DNA清除剂 1.5ml

70801-15 非酶DNA清除剂-2 15次

90318-50 柱式DNA清除剂 50次

90802-5 大提柱式DNA清除剂 5次

101001-500 Benzonase核酸酶 500U

90903-300 无RNase的DNase 300U

101004A-100 DnaseⅠ（干粉） 100mg

101004B-100 DnaseⅠ（干粉含Buffer和贮存液） 100mg

90904-50 膜结合DNA清除试剂盒 50次

60204-10 非酶多糖清除剂 10ml

其它

81027-50 TRIzol伴侣 50次

71207-5 RNA洗脱液 5ml

第二章 天净沙DNA纯化系列

DNA保存及预处理

3660-100 非冻型组织DNA保存液 100ml

3660-250 非冻型组织DNA保存液 250ml