数量：大量
保质期：一年
保存条件：4℃保存
规格：5次
它具有下列特点：
1. 单次样品处理量大，*多可以处理30 mL细菌培养物，一次处理量相当于10-20次小提的处理量。
2. 操作简单快速，一次大量提取只需要1小时左右。
3. 所得RNA纯度高，OD260/OD280一般在2.0左右。一般不含基因DNA污染。
4. 适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。
5. 大规模提取，RNA产率*多可达到100 μ g/107细胞。

我准备按照你提供的基本程序尝试一次。大提柱式细菌RNAOUT还需要问的问题是：

1.洗涤包含体，实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀，对吗？我将沉淀-20度保存，应该没有什么影响吧？另外，我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF，是蛋白酶抑制剂，它是否对目的蛋白有影响呢？

2.尿素洗涤包含体，洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE，得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。大提柱式细菌RNAOUT洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗？但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗？这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗？

3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶，不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲，而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素，对复性有影响吗？

不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我，我再仔细看看。

大提柱式细菌RNAOUT技术回答：

1）包含体在-20度或-70度保存较好，包含体状态的蛋白稳定性好，一但复性成功，溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF，是蛋白酶抑制剂，应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF，加与不加看你的蛋白的稳定性。

2）洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀，用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬，与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况，大提柱式细菌RNAOUT选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。

3）用Tris配尿素，OK! 

 70702-50 分枝杆菌DNAout 50次

70703-50 柱式分枝杆菌DNAout 50次

60701-30 土壤DNAout 30次

60701-100次 土壤DNAout 100次

71205-50 柱式土壤DNAout 50次

80928-4 大提柱式土壤DNAout 4次

病毒DNA提取

3674-50 一管式病毒DNAout 50次

3674-200 一管式病毒DNAout 200次

70701-50 柱式病毒DNAout 50次

80921-1 96孔板病毒DNAout 1次

80921-5 96孔板病毒DNAout 5次

80101-50 一站式病毒DNA-RNAout 50次

质粒DNA提取

70202-50 柱式酵母质粒DNAout 50次

90607-50 柱式BAC DNAout 50次

90608-5 中提柱式BAC DNAout 5次

60205-50 柱式质粒DNAout 50次

60205-100 柱式质粒DNAout 100次

80912-5 经典法大提质粒DNAout 5次

80912-10 经典法大提质粒DNAout 10次

80916-1 96孔板经典法质粒DNAout 1次

70903-50 一步式质粒DNAout2.0 50次