无RNASE的DNASE溶液,1U/ΜL

 数量：大量
保质期：一年
保存条件：-20℃保存
规格：300U
本产品是从牛胰DNase中精制的无RNase污染的DNase，专门用于降解RNA样品中的DNA污染，具有下列特点：
1. 高效，能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平。
2. 同时降解单链DNA和双链DNA。
3. 不含RNase，可以保证RNA分子完整性不受任何影响。
4. 反应条件经过优化，可以用于快速降解硅胶膜上吸附的DNA，也可以用于快速降解液体反应体系中的DNA。
5. 可以用于总RNA提取和体外转录中去除DNA。
6. 本产品可以用50次（对50 μL的液体样品而言）。

我准备按照你提供的基本程序尝试一次。无RNASE的DNASE溶液,1U/ΜL还需要问的问题是：

1.洗涤包含体，实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀，对吗？我将沉淀-20度保存，应该没有什么影响吧？另外，我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF，是蛋白酶抑制剂，它是否对目的蛋白有影响呢？

2.尿素洗涤包含体，洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE，得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。无RNASE的DNASE溶液,1U/ΜL洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗？但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗？这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗？

3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶，不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲，而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素，对复性有影响吗？

不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我，我再仔细看看。

无RNASE的DNASE溶液,1U/ΜL技术回答：

1）包含体在-20度或-70度保存较好，包含体状态的蛋白稳定性好，一但复性成功，溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF，是蛋白酶抑制剂，应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF，加与不加看你的蛋白的稳定性。

2）洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀，用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬，与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况，无RNASE的DNASE溶液,1U/ΜL选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。

3）用Tris配尿素，OK! 

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