大提柱式血液RNAOUT

 数量：大量
保质期：一年
保存条件：4℃保存
规格：5次
本产品具有下列特点：
1. 大量提取，每次*多可以处理30 mL血液。
2. 操作简单快捷，直接使用新鲜的（不能用冷凝血）抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。
3. 纯度高，OD260/280均在2.0左右，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究
4. 产率一般为2-5μ g/mL人血。
5. 与常用的抗凝剂（包括肝素、EDTA、柠檬酸钠、草酸钠）兼容。

我准备按照你提供的基本程序尝试一次。大提柱式血液RNAOUT还需要问的问题是：

1.洗涤包含体，实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀，对吗？我将沉淀-20度保存，应该没有什么影响吧？另外，我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF，是蛋白酶抑制剂，它是否对目的蛋白有影响呢？

2.尿素洗涤包含体，洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE，得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。大提柱式血液RNAOUT洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗？但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗？这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗？

3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶，不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲，而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素，对复性有影响吗？

不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我，我再仔细看看。

大提柱式血液RNAOUT技术回答：

1）包含体在-20度或-70度保存较好，包含体状态的蛋白稳定性好，一但复性成功，溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF，是蛋白酶抑制剂，应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF，加与不加看你的蛋白的稳定性。

2）洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀，用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬，与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况，大提柱式血液RNAOUT选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。

3）用Tris配尿素，OK! 

 ZT101-2Taq DNA Polymerase(2.5u/ul) 500UZOMANBIO

ZT101-3Taq DNA Polymerase(2.5u/ul)1000uZOMANBIO

ZT102-1Taq Plus DNA Polymerase(2.5u/ul)  250UZOMANBIO

ZT102-2Taq Plus DNA Polymerase(2.5u/ul)  500UZOMANBIO

ZT103-1Pfu DNA Polymerase(2.5u/ul) 250UZOMANBIO

ZT103-2Pfu DNA Polymerase(2.5u/ul) 500UZOMANBIO

ZT104-1long taq DNA Polymerase(2.5u/ul)250UZOMANBIO

ZT105-1冷抑制热启动HotStart?Taq?DNA Polymerase250UZOMANBIO

ZT105-2冷抑制热启动HotStart?Taq?DNA Polymerase500UZOMANBIO

ZT105-3冷抑制热启动HotStart?Taq?DNA Polymerase2500UZOMANBIO

ZT106-110x JumpStart Buffer 热启动缓冲液(不含酶）1 mlZOMANBIO

ZT106-210x JumpStart Buffer 热启动缓冲液(不含酶）5 mlZOMANBIO

ZT107-12 x SYBR Green qPCR Mix (荧光定量PCR）50 次x 50μl反应体系ZOMANBIO

ZT107-22 x SYBR Green qPCR Mix (荧光定量PCR）200 次x 50μl反应体系ZOMANBIO

MasterMix系列

ZT201-12×Taq PCR MasterMix(含染料）1mlZOMANBIO

ZT201-22×Taq PCR MasterMix(含染料）5×1mlZOMANBIO

ZT202-12×Taq PCR MasterMix（不含染料）1mlZOMANBIO

ZT202-22×Taq PCR MasterMix（不含染料）5×1mlZOMANBIO

ZT203-12×Taq Plus PCR MasterMix(含染料）0.5mlZOMANBIO