血液RNAout
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检测试剂盒
- 牛Elisa试剂盒
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抗体
蛋白/多肽/抗原
原代细胞
细胞系
分子生物学
细胞培养基
生化试剂
标准品/对照品
详细内容
数量:大量
保质期:一年
保存条件:4℃保存
规格:250次
1. RNA无明显降解和DNA污染,OD260/280均在1.9以上。产率根据物种不同而不同,人血产率一般为2-3μg/mL。
2. 操作简单,直接使用新鲜的(不能用冷凝血)抗凝全血样品,不需裂解红细胞等任何预处理步骤,整个提取过程只需要十多分钟,可以全在室温下进行。
3. 处理量大,每管的样品处理量可以达到1.5 mL,高于进口的同类产品。
4. 与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容,得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。
我准备按照你提供的基本程序尝试一次。血液RNAOUT还需要问的问题是:
1.洗涤包含体,实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀,对吗?我将沉淀-20度保存,应该没有什么影响吧?另外,我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF,是蛋白酶抑制剂,它是否对目的蛋白有影响呢?
2.尿素洗涤包含体,洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。血液RNAOUT洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗?但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗?这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗?
3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶,不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲,而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素,对复性有影响吗?
不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我,我再仔细看看。
血液RNAOUT技术回答:
1)包含体在-20度或-70度保存较好,包含体状态的蛋白稳定性好,一但复性成功,溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF,是蛋白酶抑制剂,应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF,加与不加看你的蛋白的稳定性。
2)洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀,用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬,与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况,血液RNAOUT选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。
3)用Tris配尿素,OK!
ZT303dATP 100mMsolution0.25 mlZOMANBIO
ZT304dCTP 100mM solution0.25 mlZOMANBIO
ZT305dGTP 100mM solution0.25 mlZOMANBIO
ZT306dTTP 100mM solution0.25 mlZOMANBIO
ZT307-1PCR enhancer100μlZOMANBIO
ZT307-2PCR enhancer500μlZOMANBIO
RT系列
ZR101-1TUREscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase (反转录酶)5000UZOMANBIO
ZR101-210000UZOMANBIO
ZR101-310000U X 5ZOMANBIO
ZR102-1"TUREscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit (链反转录试剂盒)
"25次ZOMANBIO
ZR102-250次ZOMANBIO
ZR103-1" TUREscript One Step RT-PCR Kit (一步法反转录试剂盒)
"25次ZOMANBIO
ZR103-250次ZOMANBIO
ZR104-1" TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit (两步法荧光定量反转录试剂盒)
"25次ZOMANBIO
ZR104-250次ZOMANBIO
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