K12大肠杆菌

 数量：大量
规格：1 管

K12大肠杆菌添加DMSO或者使用修饰化的碱基以及使用LA－Taq来扩增PCR这些在我也都做过，不过都正如你所说，都是直接扩增基因组或cDNA.

而高GC含量影响反转录也是肯定的，因为高GC肯定容易形成复杂的二级结构，这些可以参见《分子克隆》。“我至今没有听说高GC含量会不利于逆转录，有一个证据就是在FMDV基因组RNA中有长达500bp的GC tail，K12大肠杆菌这个病毒的全基因组一样被测序出来”，但这并不能说明逆转录没有遇到麻烦，人家不会告诉你经过怎样的过程才测出来的。比如，对高GC含量的模板测序会比较困难吧，可是你到网上搜一搜，高GC含量的区域多的是，不然的话我也不无法预测我的基因5‘端有一个高GC区了是吗？我们不能因此就推出GC含量高不影响测序吧？我自己的例子也证明了高GC含量影响逆转录的，因为无论是筛库还是RACE，都是只能拿到此区域的相邻3’区，而可以肯定的是，所得到的一定不是全长，可见肯定是由于逆转录不过去。在搜一下文献，可以得出我的结论的。所以我现在的困难在于反转录，而不是PCR。

K12大肠杆菌首先检查一下你的基因片断大小以及回收量（应该不是很大，所以回收的量很可能太少），太小的片断不容易连，如果是这样建议使用好的感受态，或增大回收的量。其次看一下你回收时所用的紫外，波长是否小于314nm，如果是建议使用314以上的，并且操作时间尽量减短。第三，建议将回收产物普通Taq加A，不需回收，再连一次。*后，检查一下感受态。还有，如果T－easy存放时间过长，建议使用新的。 

难度不出很大。K12大肠杆菌如果诱变的位点在基因中间，你可以用一个突变引物先引入突变；然后用这个突变体做一侧的引物（大引物），与另一个引物一起，以野生型基因为模板扩增。我们用这种方法做出来多个突变体。

 基因组DNA抽提系列

产品编号产品名称含税价

血液ＤＮＡ抽提试剂盒

全血DNA小量提取试剂盒：从小于1ml血液样品中纯化2-30ugDNA，包括寄生的病毒等基因组DNA

D3392-00Blood DNA Kit(5)

D3392-01Blood DNA Kit(50)

D3392-02Blood DNA Kit(200)

D0715-01NRBC Blood DNA Kit(50)

D0715-02NRBC Blood DNA Kit(200)

Se全血DNA小量提取试剂盒：从小于1ml血液样品中纯化2-30ug淋巴细胞基因组DNA

D3471-00SE Blood DNA Kit(20)

D3471-01SE Blood DNA Kit(50)

D3471-01*SE Blood DNA Kit(100)

D3471-02SE Blood DNA Kit(200)

96孔板血液DNA提取试剂盒：从200ul全血或干血样品中纯化2-6ug基因组DNA

D1192-00E-Z 96 Blood DNA Kit(1 x 96)

D1192-01E-Z 96 Blood DNA Kit(4 x 96)

D1192-02E-Z 96 Blood DNA Kit(20 x 96)

全血DNA中/大量提取试剂盒：