ROSETTALBLUE(DE3)大肠杆菌

 数量：大量
保质期：一年
保存条件：-80℃保存
规格：1 管

ROSETTALBLUE(DE3)大肠杆菌添加DMSO或者使用修饰化的碱基以及使用LA－Taq来扩增PCR这些在我也都做过，不过都正如你所说，都是直接扩增基因组或cDNA.

而高GC含量影响反转录也是肯定的，因为高GC肯定容易形成复杂的二级结构，这些可以参见《分子克隆》。“我至今没有听说高GC含量会不利于逆转录，有一个证据就是在FMDV基因组RNA中有长达500bp的GC tail，ROSETTALBLUE(DE3)大肠杆菌这个病毒的全基因组一样被测序出来”，但这并不能说明逆转录没有遇到麻烦，人家不会告诉你经过怎样的过程才测出来的。比如，对高GC含量的模板测序会比较困难吧，可是你到网上搜一搜，高GC含量的区域多的是，不然的话我也不无法预测我的基因5‘端有一个高GC区了是吗？我们不能因此就推出GC含量高不影响测序吧？我自己的例子也证明了高GC含量影响逆转录的，因为无论是筛库还是RACE，都是只能拿到此区域的相邻3’区，而可以肯定的是，所得到的一定不是全长，可见肯定是由于逆转录不过去。在搜一下文献，可以得出我的结论的。所以我现在的困难在于反转录，而不是PCR。

ROSETTALBLUE(DE3)大肠杆菌首先检查一下你的基因片断大小以及回收量（应该不是很大，所以回收的量很可能太少），太小的片断不容易连，如果是这样建议使用好的感受态，或增大回收的量。其次看一下你回收时所用的紫外，波长是否小于314nm，如果是建议使用314以上的，并且操作时间尽量减短。第三，建议将回收产物普通Taq加A，不需回收，再连一次。*后，检查一下感受态。还有，如果T－easy存放时间过长，建议使用新的。 

难度不出很大。ROSETTALBLUE(DE3)大肠杆菌如果诱变的位点在基因中间，你可以用一个突变引物先引入突变；然后用这个突变体做一侧的引物（大引物），与另一个引物一起，以野生型基因为模板扩增。我们用这种方法做出来多个突变体。

 PS011DNA Wash Buffer Concentrate, 500ml

PS012ETR Reagent, 100ml

PS013MGC Binding Buffer Concentrate, 20ml

PS014SPM Wash Buffer Concentrate, 40 ml

PS015Buffer GBT, 100 ml

PS016Endotoxin-Free Elution Buffer-100

RNA相关溶液

PR021TRK Lysis Buffer , 100ml

PR022QVL Lysis Buffer , 100ml

PR023Buffer ERL, 250ml

PR024Buffer YRL, 100 ml

PR025Buffer BRL, 100 ml

PR026Buffer RB, 100ml

PR027Buffer RPL, 100ml

PR028Buffer RFL, 100ml

PR029Buffer SP, 60ml

PR030RNA Wash Buffer I, 100ml

PR031RNA Wash Buffer II, 100ml

PR032DEPC-treated Water, 100ml