ORGAMI(DE3)大肠杆菌

 数量：大量
保质期：一年
保存条件：-80℃保存
规格：1 管

ORGAMI(DE3)大肠杆菌添加DMSO或者使用修饰化的碱基以及使用LA－Taq来扩增PCR这些在我也都做过，不过都正如你所说，都是直接扩增基因组或cDNA.

而高GC含量影响反转录也是肯定的，因为高GC肯定容易形成复杂的二级结构，这些可以参见《分子克隆》。“我至今没有听说高GC含量会不利于逆转录，有一个证据就是在FMDV基因组RNA中有长达500bp的GC tail，ORGAMI(DE3)大肠杆菌这个病毒的全基因组一样被测序出来”，但这并不能说明逆转录没有遇到麻烦，人家不会告诉你经过怎样的过程才测出来的。比如，对高GC含量的模板测序会比较困难吧，可是你到网上搜一搜，高GC含量的区域多的是，不然的话我也不无法预测我的基因5‘端有一个高GC区了是吗？我们不能因此就推出GC含量高不影响测序吧？我自己的例子也证明了高GC含量影响逆转录的，因为无论是筛库还是RACE，都是只能拿到此区域的相邻3’区，而可以肯定的是，所得到的一定不是全长，可见肯定是由于逆转录不过去。在搜一下文献，可以得出我的结论的。所以我现在的困难在于反转录，而不是PCR。

ORGAMI(DE3)大肠杆菌首先检查一下你的基因片断大小以及回收量（应该不是很大，所以回收的量很可能太少），太小的片断不容易连，如果是这样建议使用好的感受态，或增大回收的量。其次看一下你回收时所用的紫外，波长是否小于314nm，如果是建议使用314以上的，并且操作时间尽量减短。第三，建议将回收产物普通Taq加A，不需回收，再连一次。*后，检查一下感受态。还有，如果T－easy存放时间过长，建议使用新的。 

难度不出很大。ORGAMI(DE3)大肠杆菌如果诱变的位点在基因中间，你可以用一个突变引物先引入突变；然后用这个突变体做一侧的引物（大引物），与另一个引物一起，以野生型基因为模板扩增。我们用这种方法做出来多个突变体。

 70905-1.5 PCR级明胶溶液，2% 即将推出

80205-1.5 PCR级DMSO 即将推出

RT及RT-PCR

60905-10000 MMLV逆转录酶 10000U

60905-50000 MMLV逆转录酶 50000U

90502-200 AMV逆转录酶 200U

即用型PCR预配液及套装

60307-1.5 即用型PCR预配液 1.5ml

60307-9 即用型PCR预配液 9ml

60901-0.3 Taq DNA聚合酶抑制剂 0.3ml

61203-1.5 高GC DNA清除剂 1.5ml

80913-100 常用PCR引物 100次

80914-100 真菌专一性PCR引物 100次

70802-100 即用型PCR试剂盒2.0 100次

70802-600 即用型PCR试剂盒2.0 600次

90805-100 即用型PCR试剂盒3.0 100次