一站式平末端克隆试剂盒

 数量：大量
保质期：一年
保存条件：-20℃保存
规格：20次
基因片段用 Pfu 等DNA聚合酶扩增得到的产物为平末端，直接克隆比较困难。做 T/A 克隆时，需要在其末端添加单个碱基 A。本试剂盒提供了在平端添加单个 A 所需的所有试剂，大大方便后续的 T/A 克隆及序列分析。它具有下列特点：1. 适用范围包括：由高保真 DNA聚合酶如 Pfu、Pwo 、DeepVent等扩增而来的 PCR 产物；一些限制性内切酶如 EcoRV 、SmaI等酶切产生的 DN段； 粘端 DNA用DNA聚合酶补平后的片段。2. 可以在任何平末端DN段两端分别补上单个脱氧腺嘌呤 A，间接将 PCR产物克隆到 T 载体上。 3． 操作快速，5 分钟就可以完成 。

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。一站式平末端克隆试剂盒传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

一站式平末端克隆试剂盒除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，一站式平末端克隆试剂盒比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，一站式平末端克隆试剂盒倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，一站式平末端克隆试剂盒但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

 ZM202-250bp Plus（条带50.100.150.200.250.300.350.400.500.600.1000）500TZOMANBIO

ZM203-1100bp DNA Marker（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500）50TZOMANBIO

ZM203-2100bp DNA Marker（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500）500TZOMANBIO

ZM204-1100bp Plus（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500.2000.3000.5000）  50TZOMANBIO

ZM204-2100bp Plus（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500.2000.3000.5000）  500TZOMANBIO

ZM205-1200bp（条带200.400.600.800.1000.1200.1400.1600.1800.2000.3000）50TZOMANBIO

ZM205-2200bp（条带200.400.600.800.1000.1200.1400.1600.1800.2000.3000）500TZOMANBIO

ZM206-1250bp（条带250.500.750.1000.1500.2000.2500.3000.5000）50TZOMANBIO

ZM206-2250bp（条带250.500.750.1000.1500.2000.2500.3000.5000）500TZOMANBIO

ZM207-1300bp（条带300.600.900.1200.1500.1800.2500.3000.5000）50TZOMANBIO

ZM207-2300bp（条带300.600.900.1200.1500.1800.2500.3000.5000）500TZOMANBIO

ZM208-1500bp（500.1000.1500.2000.2500.3000.3500.5000） 50TZOMANBIO