一站式TA克隆试剂盒

 数量：大量
保质期：一年。感受态细胞需要干冰运输，-70℃保存，有效期6个月。
保存条件：-20℃保存
规格：20次
AT克隆就是利用T载体两个3＇端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3＇端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。本产品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特点： 1. 一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行AT克隆。2. T载体由XcmI酶切方法制备，两个5＇端100%含T突出，自连率几乎为零。3. 克隆效率高，一次AT克隆实验一般能得到上百个重组子。4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点（如BstZI、EcoRI、NotI），便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。7. 克隆位点两侧分别有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。10. 含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。一站式TA克隆试剂盒传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

一站式TA克隆试剂盒除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，一站式TA克隆试剂盒比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，一站式TA克隆试剂盒倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，一站式TA克隆试剂盒但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

 ZM403-2DL15000 Plus                                      （条带250.500.1000.1500.2500.4000.5000.7500.10000.15000）500TZOMANBIO

ZM404-1DL2000（条带100.250.500.750.1000.2000）50TZOMANBIO

ZM404-2DL2000（条带100.250.500.750.1000.2000）1000TZOMANBIO

ZM405-1DL2000  Plus                                    （条带100.250.500.750.1000.2000.3000.5000）50TZOMANBIO

ZM405-2DL2000  Plus                                    （条带100.250.500.750.1000.2000.3000.5000）500TZOMANBIO

酶切类marker系列

ZM406-1λ /HindIII50TZOMANBIO

ZM406-2λ /HindIII500TZOMANBIO

ZM407-1pUC18/MspI20TZOMANBIO

ZM407-2pUC18/MspI200TZOMANBIO

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