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一站式长效期SDS-PAGE电泳套装 (适合30 kD以上蛋白)
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抗体
蛋白/多肽/抗原
原代细胞
细胞系
分子生物学
生化试剂
标准品/对照品
详细内容
数量:大量
保质期:一年
保存条件:4℃保存(上样缓冲液需要-20℃保存)
规格:30次
本产品是在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)套装基础上改良而得,主要改良的地方有两处:一是配胶液的pH偏酸,二是将还原剂加入到电泳液中。这些改良使本产品具有下列特点:1. 偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE更加稳定,便于配预制胶,增加实验的可重复性。2. 能降低蛋白质的脱氨反应和烷基化反应,也能阻止蛋白质的二硫键再生成。3. 把还原剂整合到电泳液中,避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键,蛋白条带比常规SDS-PAGE更加锐利。4. 把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个,成分更简单。5. 更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合30 kD以上蛋白,B型适合2-30 kD蛋白),不需要配制专门Tricine-SDS-PAGE,更加方便。6. 即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。7. 安全,免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。8. 电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。一站式长效期SDS-PAGE电泳套装 (适合30 KD以上蛋白)传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出,表达量则常常超过大肠杆菌系统,如果实现高效分泌表达,则纯化成本非常低,具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。
一站式长效期SDS-PAGE电泳套装 (适合30 KD以上蛋白)除了用于规模化生产重组蛋白之外,毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用,比如表达蛋白用于结构分析,信号传导途径研究,当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少,一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。
如果需要,完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索,从以往的战绩来看,毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了,一站式长效期SDS-PAGE电泳套装 (适合30 KD以上蛋白)比例也很高,虽然仍存在风险。
1)原核诱导时间,从你的结果来看,诱导1-5小时变化不大,时间点影响较小,取3小时没有问题。很多情况下,温度对可溶性影响较大,不知道你30度诱导的可溶性如何?如果蛋白主要是可溶性的,那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体,一站式长效期SDS-PAGE电泳套装 (适合30 KD以上蛋白)倒是可以再降低一下诱导温度。此外,很多蛋白包含体复性后有活性,如果可溶性表达困难或表达量太低,仍可以考虑包含体复性策略。
2)酵母细胞的破壁可以采用机械法,也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨,主要用于中试和生产,但有的仪器也可以兼顾实验室规模,这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体,是一种外源基因高效转化的方法,一站式长效期SDS-PAGE电泳套装 (适合30 KD以上蛋白)但用于破壁检测表达则成本太高,此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献,是小量裂截用于表达检测的,我没有直接作过,但我们实验室的研究生反映还可以。
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