一管式TMB显色液A (可溶型)

 数量：大量
保质期：一年
保存条件：2-8℃避光保存
规格：100mL
四甲基联苯胺，即TMB(3，3′，5，5′-Tetramethylbenzidine)，是辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）的显色底物，在辣根过氧化物酶和H2O2存在时，TMB会产生可溶性蓝色产物(光吸收在370 nm)，加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450 nm测定吸光度，因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。跟HRP的其他底物（如ABTS和OPD）相比，TMB不但灵敏，而且无毒，所以在ELISA中的应用日趋广泛。传统的TMB显色试剂一般由两组份组成(另一个是H2O2)，必须在使用前新鲜配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致操作误差。为克服这些缺点，本公司开发了只有一个溶液的TMB显色液，它具有下列特点：1. 即开即用，操作简单，用户不需要配制任何溶液。2. 显色液只是单一溶液，简化了操作步骤，降低了操作误差，结果更加稳定。3. 既可用于ELISA等的显色液，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。4. 该底物溶液含TMB、H2O2和特殊的稳定剂，可以在4℃长期放置。5. 分沉淀可溶型（A型，适用于ELISA）和沉淀不可溶型（B型，适用于Western免疫检测）两种。

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。一管式TMB显色液A (可溶型)传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

一管式TMB显色液A (可溶型)除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，一管式TMB显色液A (可溶型)比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，一管式TMB显色液A (可溶型)倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，一管式TMB显色液A (可溶型)但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

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