一站式HIS标记蛋白质微量纯化套装(超声破碎细胞)

 数量：大量
保质期：一年
保存条件：介质请于20%乙醇中4℃保存，PMSF于-20℃保存，其余试剂4℃放置
规格：20次
基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，其原理是用基因重组的方法使待纯化蛋白的N端或C端携带一段His序列（一般是6个His），然后利用偶联了Ni离子的琼脂糖与His的亲和作用而将His-标记蛋白与其他蛋白质分开，与Ni-琼脂糖结合的蛋白*后用咪唑溶液洗脱即可。本产品就是专门用于上述实验的一站式产品，它具有下列特点：1. 一站式套装，含所需的各种溶液和耗材，用户只需要提供表达His蛋白的细菌即可，非常方便。2. 每次可以处理30-100 mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。3. 提供4 mL浓度为50%的镍柱介质，本介质可以反复使用多次。4. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。一站式HIS标记蛋白质微量纯化套装(超声破碎细胞)传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

一站式HIS标记蛋白质微量纯化套装(超声破碎细胞)除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，一站式HIS标记蛋白质微量纯化套装(超声破碎细胞)比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，一站式HIS标记蛋白质微量纯化套装(超声破碎细胞)倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，一站式HIS标记蛋白质微量纯化套装(超声破碎细胞)但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

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