数量： 大量
保质期： 6个月
保存条件： -20℃或-80℃避光保存
规格： 100次
由于检测光量子的方法非常敏感，采用生物发光（bioluminescent）法 ，是报告基因检测*常用的有效手段。荧光素酶（luciferase）催化底物荧光素（luciferin）的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海肾荧光素酶（Ranilla luciferase）催化的发光反应，具有相似的光学特征和很好的浓度线性范围（7~8个数量级的线性范围），酶的检测灵敏度达10-18~10-20 mol，但两者催化的化学反应底物和*适反应条件完全不同。利用这一特性，将这两种荧光素酶配合，即可形成十分有效的双荧光素酶报告基因系统，其中Ranilla luciferase通常作为内参照。本试剂盒提供了一体化形式的双荧光素酶检测系统。采用通用裂解缓冲液，适合于两种荧光素酶活性的保持，且与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容。优化的两种酶反应体系，使每种发光反应持续数十分钟，以便于手工操作多个样品，并保证Firefly luciferase发光及时淬灭，不影响后续Ranilla luciferase的测定。优化的反应体系还使两种荧光素酶活性比值趋于合理的敏感范围，更有利于后续数据的比较。该产品特点如下：1. 准确性高：使用海肾荧光素酶作为内参照，减少了细胞数目、细胞健康状态、转染效率和非特异性细胞反应等因素的影响，使主报告基因的结果归一化2. 高度灵敏：对两种荧光素酶的检测灵敏度达10-18~10-20 mol3. 线性范围宽：线性范围达到7~8个数量级4. 快速简便：一体化两步法检测，特别适合于高通量筛选

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。双荧光素酶报告基因检测试剂盒传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

双荧光素酶报告基因检测试剂盒除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，双荧光素酶报告基因检测试剂盒比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，双荧光素酶报告基因检测试剂盒倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，双荧光素酶报告基因检测试剂盒但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

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