细胞核微量制备试剂盒
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抗体
蛋白/多肽/抗原
原代细胞
细胞系
分子生物学
生化试剂
标准品/对照品
详细内容
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: 常温保存
规格: 50次
用高密度介质来分离动物软体组织(如肝脏、脾脏等)细胞核是目前主流的方法,它是由Chauveau于1956年发明,其原理是细胞核的密度较大,在高速离心条件下可在高密度介质中沉降下来,从而达到与细胞质其它成分分开的目的。该方法能通过一步离心得到较高纯度的细胞核,得到广泛应用。本产品就是在Chauveau方法的基础上优化改进而来,它具有下列特点:1. 基于密度梯度分离,可有效去除细胞质及其他细胞器,得到的细胞核纯净。 2. 加入了可以改变分离介质渗透压的物质,减少了细胞核的脆性,增加了细胞核的完整性。3. 精心调节了介质的pH,防止细胞核在分离过程中的聚集,还能保持细胞核的精细结构。4. 快速,整个操作过程仅需1小时即可完成(对一个样品而言)。5. 提供染色试剂,可以在普通光学显微镜下检测纯化的细胞核的纯度。6. 处理温和,得到的细胞核中的大部分蛋白质都具有活性,可以用于胶迟阻实验、酶活性分析细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究;也可用于超大片段DNA的纯化。7. 不但适用于动物和植物培养细胞,还能用于实体组织(能用Dounce或Potter匀浆器匀浆的组织均可)。8. 一次微量提取足够处理0.1 g组织或5×107个培养细胞,本产品足够50次细胞核微量提取。
酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。细胞核微量制备试剂盒传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出,表达量则常常超过大肠杆菌系统,如果实现高效分泌表达,则纯化成本非常低,具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。
细胞核微量制备试剂盒除了用于规模化生产重组蛋白之外,毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用,比如表达蛋白用于结构分析,信号传导途径研究,当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少,一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。
如果需要,完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索,从以往的战绩来看,毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了,细胞核微量制备试剂盒比例也很高,虽然仍存在风险。
1)原核诱导时间,从你的结果来看,诱导1-5小时变化不大,时间点影响较小,取3小时没有问题。很多情况下,温度对可溶性影响较大,不知道你30度诱导的可溶性如何?如果蛋白主要是可溶性的,那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体,细胞核微量制备试剂盒倒是可以再降低一下诱导温度。此外,很多蛋白包含体复性后有活性,如果可溶性表达困难或表达量太低,仍可以考虑包含体复性策略。
2)酵母细胞的破壁可以采用机械法,也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨,主要用于中试和生产,但有的仪器也可以兼顾实验室规模,这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体,是一种外源基因高效转化的方法,细胞核微量制备试剂盒但用于破壁检测表达则成本太高,此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献,是小量裂截用于表达检测的,我没有直接作过,但我们实验室的研究生反映还可以。
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