数量： 大量
保质期： 一年
保存条件： -20℃保存
规格： 50次
p19 miRNA 检测试剂盒利用 p19 蛋白的强结合能力来检测与特异探针形成杂交体的 miRNA。p19 蛋白 (19 kDa) 来自于植物香石竹意大利环斑病毒 (CIRV) ，与小片段 dsRNA 有高度亲和性。该蛋白与 21 nt siRNA 更易结合，而不结合相同长度的 ssRNA 或 dsDNA。待 siRNA 或 miRNA:RNA 探针杂交体与 p19 结合后，可用磁性分离架 和 SDS 轻松分离，洗脱体积可以控制到很小。p19 磁珠还可将细胞质总 RNA 混合物中的 siRNA 水平富集 3,000 倍。用 p19 进行 miRNA 检测有以下两个优点：一是结合效率高，二是与不同长度的 dsRNA 结合力不同。与特定 miRNA 互补且标记的 RNA 探针杂交，可获得 dsRNA 杂交体。该杂交体可与 p19 几丁质磁珠选择性结合，清洗未结合的探针，通过凝胶电泳计算或分析洗脱的双链 miRNA:RNA-探针。使用 32P 放射性 RNA 探针，可从百万倍未标记的 RNA 中检测到 10 pg 级的 miRNA。本产品具有下列特点：1. 快速、简捷的 miRNA 检测方法2. 可检测 pg 级别的样品，背景很低3. 定量检测，三个 log 后仍为线性4. p19 几丁质磁珠在 4 ℃下可保存 6个月5. miRNA: RNA-探针杂交体的结合与miRNA 片段大小有关，与序列无关

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。P19 MIRNA 检测试剂盒传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

P19 MIRNA 检测试剂盒除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，P19 MIRNA 检测试剂盒比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，P19 MIRNA 检测试剂盒倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，P19 MIRNA 检测试剂盒但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

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