数量： 大量
保质期： 一年
保存条件： -20℃保存
规格： 800U
Bst DNA聚合酶大片段是将缺失5＇→3＇外切核酸酶结构域的Bacillus stearothermophilus（嗜热脂肪芽孢杆菌）DNA聚合酶基因在E.coli中表达纯化而得，它具有5＇→3＇DNA聚合酶活性，但不 具有5＇→3＇外切核酸酶活性。它具有下列特点：1. 嗜温性和强链置能力，可以用于LAMP扩增。2. 可以在68℃测序，适合纳克含量DNA模板的快速测序和富含GC区域的DNA测序。建议反应温度不要超过 70 ℃。3. 不具有 3＇ →5＇ 外切酶活性，没有纠错功能。4. 80℃ 10分钟即可热失活。

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。BST DNA聚合酶，大片段传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

BST DNA聚合酶，大片段除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，BST DNA聚合酶，大片段比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，BST DNA聚合酶，大片段倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，BST DNA聚合酶，大片段但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

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